[發(fā)明專利]一種分離測(cè)定丙氨酸酯類鹽含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211180197.2
• 申請(qǐng)日: 2022-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN115541749A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉英;陳玉娟;周寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華熙生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/96
• 代理公司: 北京唐頌永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N分離測(cè)定丙氨酸酯類鹽含量的方法，采用氨基酸分析儀，以陽(yáng)離子交換樹脂柱為分離柱，以流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，利用柱后衍生化反應(yīng)測(cè)定丙氨酸酯類鹽的含量。本申請(qǐng)使用氨基酸自動(dòng)分析儀，茚三酮為柱后衍生化試劑，并使用醋酸鈉作為流動(dòng)相進(jìn)行分離，可以很好的將丙氨酸酯類鹽與其他組分分離，測(cè)得丙氨酸酯類鹽含量，方法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，檢測(cè)限低。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及分析分離領(lǐng)域，具體涉及丙氨酸酯類鹽含量的分離和測(cè)定的方法。

背景技術(shù)

β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽又叫3-氨基丙酸甲酯鹽酸鹽，是一種細(xì)粉末晶體，易溶于水，不溶于或微溶于丙酮。其生產(chǎn)工藝主要采用酶轉(zhuǎn)化法。可用作食品添加劑，飼料、醫(yī)藥中間體。

β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽在醫(yī)藥及農(nóng)藥中間體的制備方面有著重要的應(yīng)用，同時(shí)β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽是合成肌肽等的重要原料。

專利CN201310298964.4公開了采用N-BOC-β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽與L-組氨酸在強(qiáng)堿催化下胺解反應(yīng)，酸脫氨基保護(hù)，制備得到L-肌肽。

專利CN201810357806.4公開了采用L-組氨酸、去離子水、β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽，用堿性溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0-9.0，加入酶，進(jìn)行酶反應(yīng)制備L-肌肽，離心、超濾、納濾、上柱、濃縮、攪拌、析晶等工藝得到肌肽粗品，析晶、攪拌析晶、放料離心、減壓真空干燥等工藝得肌肽精品。

在使用β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽進(jìn)行醫(yī)藥及農(nóng)藥或肌肽的制備過(guò)程中，因工藝多繁瑣冗長(zhǎng)，制備過(guò)程中的中間產(chǎn)物或粗品或精品中往往不同程度的殘留β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽，對(duì)β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽含量進(jìn)行分析和檢測(cè)有助于對(duì)肌肽等轉(zhuǎn)化和純化方法的評(píng)估，及時(shí)有效控制轉(zhuǎn)化或反應(yīng)條件，提高產(chǎn)率。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N丙氨酸酯類鹽的檢測(cè)方法，利用氨基酸分析儀，茚三酮做為衍生化試劑，采用柱后衍生技術(shù)，回收率高、重現(xiàn)性好，精密度高，檢測(cè)限低，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)丙氨酸酯類鹽高效、準(zhǔn)確及快速檢測(cè)。

具體的，本申請(qǐng)采用的技術(shù)方案是：

1、一種分離測(cè)定丙氨酸酯類鹽含量的方法，包括如下步驟：

采用氨基酸分析儀，以陽(yáng)離子交換樹脂柱為分離柱，以流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，利用衍生化試劑和反應(yīng)柱進(jìn)行衍生化反應(yīng)后，采用光度法測(cè)定丙氨酸酯類鹽的含量。

2、根據(jù)項(xiàng)1所述的方法，其所述流動(dòng)相為無(wú)機(jī)溶劑，優(yōu)選，所述無(wú)機(jī)溶劑為無(wú)機(jī)酸或其鹽、無(wú)機(jī)堿、乙醇中任意一種或任意兩種的混合物，所述無(wú)機(jī)酸或其鹽優(yōu)選為磷酸和醋酸鈉；所述無(wú)機(jī)堿優(yōu)選為氫氧化鈉。

3、根據(jù)項(xiàng)1-2中任一項(xiàng)所述的方法，所述衍生化試劑包括衍生化反應(yīng)試劑和衍生化緩沖液，優(yōu)選，所述衍生化反應(yīng)試劑為鄰苯二甲醛或茚三酮試劑。

4、根據(jù)項(xiàng)1-3中任一項(xiàng)所述的方法，所述流動(dòng)相包括：

流動(dòng)相A，為磷酸和乙醇的水溶液，優(yōu)選，磷酸10-20wt％、乙醇5-15wt％；

流動(dòng)相B，為磷酸和醋酸鈉的水溶液，優(yōu)選，磷酸2-10wt％、醋酸鈉5-10wt％；

流動(dòng)相C，為醋酸鈉的水溶液，優(yōu)選，醋酸鈉溶液2-10wt％；

流動(dòng)相D，為醋酸鈉和乙醇的水溶液，優(yōu)選，醋酸鈉5-10wt％、乙醇0.5-5wt％，

流動(dòng)相E，為乙醇和氫氧化鈉的水溶液，優(yōu)選乙醇溶液60-85wt％、氫氧化鈉0.5-5wt％。

5.根據(jù)項(xiàng)1-4中任一項(xiàng)所述的方法，所述衍生化試劑包括，

衍生化反應(yīng)試劑R1，30-50mg/mL茚三酮丙二醇溶液；

衍生化緩沖液R2，15-25mg/mL乙酸鈉+20-60mg/mL乙二醇；