[發(fā)明專利]一種分離測(cè)定丙氨酸酯類鹽含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211180197.2
• 申請(qǐng)日: 2022-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN115541749A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉英;陳玉娟;周寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華熙生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/96
• 代理公司: 北京唐頌永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

1.一種分離測(cè)定丙氨酸酯類鹽含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用氨基酸分析儀，以陽(yáng)離子交換樹脂柱為分離柱，以流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，利用衍生化試劑和反應(yīng)柱進(jìn)行衍生化反應(yīng)后，采用光度法測(cè)定丙氨酸酯類鹽的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相為無機(jī)溶劑，優(yōu)選，所述無機(jī)溶劑為無機(jī)酸或其鹽、無機(jī)堿、乙醇中任意一種或任意兩種的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述衍生化試劑包括衍生化反應(yīng)試劑和衍生化緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相包括：

流動(dòng)相A，為磷酸和乙醇的水溶液，優(yōu)選，磷酸10-20wt％、乙醇5-15wt％；

流動(dòng)相B，為磷酸和醋酸鈉的水溶液，優(yōu)選，磷酸2-10wt％、醋酸鈉5-10wt％；

流動(dòng)相C，為醋酸鈉的水溶液，優(yōu)選，醋酸鈉溶液2-10wt％；

流動(dòng)相D，為醋酸鈉和乙醇的水溶液，優(yōu)選，醋酸鈉5-10wt％、乙醇0.5-5wt％，

流動(dòng)相E，為乙醇和氫氧化鈉的水溶液，優(yōu)選乙醇溶液60-85wt％、氫氧化鈉0.5-5wt％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述衍生化試劑包括，

衍生化反應(yīng)試劑R1，30-50mg/mL茚三酮丙二醇溶液；

衍生化緩沖液R2，15-25mg/mL乙酸鈉+20-60mg/mL乙二醇；

衍生化緩沖液R3，4-6％乙醇溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫和衍生化反應(yīng)條件包括：

采用流動(dòng)相A；

隨后，采用流動(dòng)相B；

隨后，采用流動(dòng)相C；

隨后，采用流動(dòng)相A；

隨后，采用流動(dòng)相D，衍生化反應(yīng)試劑R1，衍生化緩沖液R2；

隨后，采用流動(dòng)相D，衍生化反應(yīng)試劑R1，衍生化緩沖液R2；

隨后，采用流動(dòng)相E，衍生化緩沖液R3；

隨后，采用流動(dòng)相A。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述分離柱為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂柱，優(yōu)選為含有磺酸基的陽(yáng)離子交換樹脂柱，所述反應(yīng)柱的填充物為石英砂或者是金剛砂。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述分離柱柱溫為50-60℃；所述反應(yīng)柱柱溫為125-140℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述光度法的檢測(cè)波長(zhǎng)為550nm-575nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，進(jìn)樣到所述分離柱的進(jìn)樣量為10-30μL。