[發(fā)明專利]一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲草素的方法

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• 申請日: 2022-09-26
• 公開（公告）號: CN115448965A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發(fā)明（設計）人: 穆廷楨;邢建民;楊茂華;苗得露;趙胥浩
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C07H19/16
• 分類號: C07H19/16;C07H1/06
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 陳小龍

本發(fā)明涉及一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲草素的方法，包括：(1)將干燥后的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉碎、過篩，得到蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉；(2)將蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉用纖維素酶和蛋白酶進行復合酶解處理，過濾，收集濾液；(3)將濾液過大孔樹脂柱，依次用水和乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液；(4)將洗脫液用高效液相色譜法進行純化，即得。本發(fā)明所涉及的分離純化蟲草素的方法全程不涉及熱提取和有毒溶劑的使用，全過程也無強酸強堿類物質(zhì)參與，并且具有提取時間短，反應條件溫和，產(chǎn)物不易變性，產(chǎn)品純度高等優(yōu)點，是一個低碳綠色的化工制備分離過程。

技術領域

本發(fā)明屬于蟲草素分離技術領域，涉及一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲草素的方法。

背景技術

蝙蝠蛾擬青霉是從冬蟲夏草分離得到的一種蟲草真菌，在冬蟲夏草中廣泛存在，該菌株可通過發(fā)酵培養(yǎng)后，獲得干燥的菌絲體產(chǎn)物，其藥理作用和化學成分與冬蟲夏草相似，具有保護腎臟功能、增強機體免疫力、抗腫瘤等藥理作用。由于野生冬蟲夏草非常珍貴，且資源稀缺，現(xiàn)蝙蝠蛾擬青霉菌絲體已日漸成為冬蟲夏草的替代品。富含多糖、核苷類、多種氨基酸、重要微量元素和總黃酮等營養(yǎng)物質(zhì)，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體被國家食品藥品監(jiān)督局批準的可用于保健食品的真菌菌種。

蟲草素又稱冬蟲夏草素、蟲草菌素，別名3’-脫氧腺苷，化學式為C₁₀H₁₃N₅O₃，是蝙蝠蛾擬青霉的主要活性成分，是第一個從真菌中分離出來的核苷類抗生素,研究結果表明，蟲草素具有肺腎的保護性、抗三高、抗腫瘤、神經(jīng)保護性、抗炎、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等生物活性。因此，蟲草素在抗衰老、保健、新藥研制等領域備受學者關注，有良好的臨床應用前景。

目前蟲草素價格昂貴，可達每克數(shù)萬元，開發(fā)更加高效的蟲草素制備方法意義重大。野生冬蟲夏草的蟲草素含量比較低，而通過蝙蝠蛾擬青霉菌株發(fā)酵培養(yǎng)可以極大提高蟲草素的含量，進一步結合高效的分離純化方法，獲得高純度的蟲草素產(chǎn)品，從而對我國蟲草市場形成有力的補充。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲草素的方法。

為達到此發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

第一方面，本發(fā)明提供一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲草素的方法，所述方法包括：

(1)將干燥后的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉碎、過篩，得到蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉；

(2)將蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉用纖維素酶和蛋白酶進行復合酶解處理，過濾，收集濾液；

(3)將濾液過大孔樹脂柱，依次用水和乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液；

(4)將洗脫液用高效液相色譜法進行純化，即得。

本發(fā)明所涉及的分離純化蟲草素的方法依次經(jīng)過前處理、復合酶解處理、過大孔樹脂柱純化處理和高效液相分離純化，全程不涉及熱提取和有毒溶劑的使用，全過程也無強酸強堿類物質(zhì)參與，并且具有提取時間短，反應條件溫和，產(chǎn)物不易變性，產(chǎn)品純度高等優(yōu)點，是一個低碳綠色的化工制備分離過程。因此，本發(fā)明具有環(huán)保和節(jié)能的雙重意義，為蟲草素的有效利用創(chuàng)造了條件。

優(yōu)選地，所述纖維素酶包括β-葡萄糖苷酶、內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶。

優(yōu)選地，所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶和胰蛋白酶。

本發(fā)明所涉及的分離純化方法中使用的復合酶優(yōu)選使用上述特定類型的纖維素酶和蛋白酶，使最終產(chǎn)品的純度更高。

優(yōu)選地，所述纖維素酶中濾紙酶活與β-葡萄糖苷酶活的比例為(3-5):1，例如3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1等，該數(shù)值范圍內(nèi)的其他具體點值均可選擇，在此便不再一一贅述。