[發(fā)明專利]一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211176125.0
• 申請(qǐng)日: 2022-09-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115448965A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 穆廷楨;邢建民;楊茂華;苗得露;趙胥浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所
• 主分類號(hào): C07H19/16
• 分類號(hào): C07H19/16;C07H1/06
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 陳小龍

1.一種從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)將干燥后的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉碎、過(guò)篩，得到蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉；

(2)將蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉用纖維素酶和蛋白酶進(jìn)行復(fù)合酶解處理，過(guò)濾，收集濾液；

(3)將濾液過(guò)大孔樹(shù)脂柱，依次用水和乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

(4)將洗脫液用高效液相色譜法進(jìn)行純化，即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述纖維素酶包括β-葡萄糖苷酶、內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶；

優(yōu)選地，所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶和胰蛋白酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述纖維素酶中濾紙酶活與β-葡萄糖苷酶活的比例為(3-5):1；

優(yōu)選地，所述木瓜蛋白酶酶活與胰蛋白酶酶活的比例為1:(1-3)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述纖維素酶的添加量為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉的0.1-0.8％；

優(yōu)選地，所述蛋白酶的添加量為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉的0.5-1.5％；

優(yōu)選地，所述復(fù)合酶解處理在pH＝5.0-5.5，溫度為45-55℃下進(jìn)行30-70min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述大孔樹(shù)脂柱為D101大孔樹(shù)脂柱；

優(yōu)選地，所述濾液以0.5-1.5BV/hr的流速上樣吸附于大孔樹(shù)脂柱；

優(yōu)選地，所述水的洗脫體積為1-4倍柱體積。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述乙醇水溶液以2-6BV/hr的流速進(jìn)行洗脫；

優(yōu)選地，所述乙醇水溶液的洗脫時(shí)間為1.5-2.5h；

優(yōu)選地，所述乙醇水溶液的濃度為50-98％，進(jìn)一步優(yōu)選70-90％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述高效液相色譜法中使用的固定相為C18柱；

優(yōu)選地，所述高效液相色譜法中使用的流動(dòng)相為甲醇水溶液；

優(yōu)選地，所述甲醇水溶液的濃度為10-40％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述高效液相色譜法中檢測(cè)波長(zhǎng)為258-262nm；

優(yōu)選地，所述高效液相色譜法中流動(dòng)相流速為0.8-1.2mL/min；

優(yōu)選地，所述高效液相色譜法中檢測(cè)溫度為28-32℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉的制備方法包括：

將蝙蝠蛾擬青霉菌株接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，之后過(guò)濾發(fā)酵液，收集烘干菌絲體，然后粉碎，過(guò)篩，即得。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的從蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中分離純化蟲(chóng)草素的方法，其特征在于，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成包括：蔗糖、豆餅粉、硫酸氫二鉀和硫酸鎂，pH為6.0-7.0；

優(yōu)選地，所述發(fā)酵條件為：轉(zhuǎn)速100-250rpm，溫度為22-28℃，時(shí)間為100-140h；

優(yōu)選地，所述烘干在溫度75-85℃下進(jìn)行；

優(yōu)選地，所述過(guò)篩的目數(shù)為60-100目。