[發明專利]檢測濕疹-血小板減少性紫癜的引物組合、試劑和試劑盒、WASP基因突變體及應用

在審

• 申請號: 202211150533.9
• 申請日: 2022-09-21
• 公開（公告）號: CN116064770A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 曾橋;鄧亞蘭;吳偉娟;王維
• 申請（專利權）人: 湖南家輝生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12N15/12
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明屬于醫學診斷技術領域，具體涉及檢測濕疹?血小板減少性紫癜的引物組合、試劑和試劑盒、WASP基因突變體及應用。利用本發明擴增引物能夠擴增野生型WASP基因和濕疹?血小板減少性紫癜患者WASP基因，再利用測序引物進行測序，能夠區分野生型WASP基因和濕疹?血小板減少性紫癜患者WASP基因，診斷濕疹?血小板減少性紫癜。并且本發明首次發現包括c.132+1GA和/或c.1110delA的WASP基因突變體可以導致濕疹?血小板減少性紫癜，通過檢測是否攜帶有WASP基因突變體，能夠用于濕疹?血小板減少性紫癜的遺傳學診斷，以及產前診斷和優生優育，為濕疹?血小板減少性紫癜患者的治療提供全新的理論依據。

技術領域

本發明屬于醫學診斷技術領域，具體涉及檢測濕疹-血小板減少性紫癜的引物組合、試劑和試劑盒、WASP基因突變體及應用。

背景技術

濕疹-血小板減少性紫癜(MIM?301000)，是一種X連鎖隱性遺傳性疾病，以血小板減少伴血小板體積減小、濕疹、免疫缺陷三聯征為主要表現，同時患者易患自身免疫性疾病和淋巴瘤。如不經造血干細胞移植，WASP蛋白表達陰性患者平均生存期僅15歲左右。根據WASP基因不同突變形式，臨床可表現為典型型、X連鎖血小板減少癥(X-linkedthrombocytopenia，XLT)、間歇性X連鎖血小板減少癥(intermittent?X-linkedthrombocytopenia，IXLT)和X連鎖粒細胞減少癥(X-linked?neutrapenia，XLN)幾種不同臨床類型。其中XLN無血小板減少和血小板體積減小等特點，主要表現為先天性中性粒細胞減少。目前該病的估計發病率約1/100000活產兒，該病幾乎只影響男性，北美地區發病率為1/250000活產男嬰。

濕疹-血小板減少性紫癜致病基因WASP(MIM?300392)定位于染色體Xp11.23-p11.22，基因全長7.6kb，包含12個外顯子和11個內含子，編碼502個氨基酸組成的的WASP蛋白(WASP)。WASP通過發夾狀結構呈非活化狀態。多種信號可活化WASP，打開發夾結構，促進下游肌動蛋白的多聚化和細胞骨架重塑。WASP是一種造血系統特異表達的細胞內信號傳導分子和骨架蛋白，調節肌動蛋白多聚化，促進細胞骨架及免疫突觸形成。目前已有超過300種WASP基因致病突變報道。錯義突變是最常見的突變類型，其次為拼接位點突變、缺失突變、無義突變、插入突變和復合突變。大多數錯義突變位于第1-4外顯子，拼接位點突變多位于第6-10內含子，無義突變和插入/缺失、復合突變分布于整個WASP基因。

基因突變是導致濕疹-血小板減少性紫癜發生發展的重要遺傳基礎，基因診斷是確診濕疹-血小板減少性紫癜的金標準。臨床上需要針對不同突變建立相應的檢測技術并用于明確病因和疾病診斷，研發檢測方法，確定突變位點，助力濕疹-血小板減少性紫癜基因突變的篩查和診斷，并為其藥物篩選、藥效評價及靶向治療，具有中藥意義。

發明內容

本發明的目的在于提供檢測濕疹-血小板減少性紫癜的引物組合、試劑和試劑盒、WASP基因突變體及應用，豐富濕疹-血小板減少性紫癜的致病突變譜，精準判斷濕疹-血小板減少性紫癜，用于濕疹-血小板減少性紫癜的遺傳學診斷以指導治療，以及胚胎植入前遺傳學診斷和優生優育。

本發明提供了一種檢測濕疹-血小板減少性紫癜的引物組合，所述引物組合包括擴增引物和測序引物；

所述擴增引物包括擴增引物1和/或擴增引物2；

所述擴增引物1包括上游引物WASP-1F和下游引物WASP-1R；所述WASP-1F包括如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；所述WASP-1R包括如SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列；

所述擴增引物2包括上游引物WASP-2F和下游引物WASP-2R；所述WASP-2F包括如SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列；所述WASP-2R包括如SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列。

優選的，所述測序引物包括測序引物1和/或測序引物2；