[發(fā)明專利]趨化因子聯(lián)合檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211148135.3
• 申請日: 2022-09-20
• 公開（公告）號: CN115586332A
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳揚;徐陳槐;潘興鑫;周延慶;汪濤;張現(xiàn)俠
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州賽基生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/68
• 代理公司: 上海恒銳佳知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31286
• 代理人: 吳浩

本發(fā)明提供了一種趨化因子聯(lián)合檢測試劑盒及其制備方法，趨化因子包括但不局限于CCL2、CCL5、CXCL9和CXCL10四種。本發(fā)明的趨化因子檢測試劑盒及其制備方法，能夠在同一樣品中同時完成CCL2、CCL5、CXCL9、CXCL10的檢測，方便臨床應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種趨化因子聯(lián)合檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

趨化因子是一類細胞因子樣分泌蛋白的超家族，包括CXC、CC、C及CX3C四個亞族，通過與靶細胞表面的受體結(jié)合發(fā)揮趨化作用，參與多種生理和病理過程，包括炎癥、感染、免疫、腫瘤等。

CCL2又名單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)，主要由血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、中性粒細胞和單核/巨噬細胞、成纖維細胞、B淋巴細胞表達和分泌。CCL2吸引單核細胞并激活它們，它還能吸引嗜堿性粒細胞、活化的T細胞、NK細胞和未成熟的樹突狀細胞。這些蛋白質(zhì)可以與其他物種的細胞發(fā)生反應(yīng)。相比于后來發(fā)現(xiàn)的MCP-2和MCP-3，CCL2對單核細胞的趨化作用更強，CCL2與其特異性受體CC類趨化因子受體2(CCR2)發(fā)生特異性結(jié)合后可上調(diào)單核細胞和巨噬細胞表面的黏附分子，并促進細胞因子IL-1、IL-6的產(chǎn)生。CCL2在多種炎癥反應(yīng)中起到重要作用，比如關(guān)節(jié)炎、急性胰腺炎、特發(fā)性炎癥性肌病、顳動脈炎和風(fēng)濕性多肌痛等。

趨化因子配體5(CCL5)又名T細胞表達與分泌的趨化因子(RANTES)屬于C-C趨化因子家族，分子質(zhì)量約為8kD，由68個氨基酸殘基構(gòu)成，前體是高度堿性的蛋白，N端缺乏糖基化位點。其三維單體結(jié)構(gòu)具有高度保守性，包含一個C端的螺旋、一個三股反向平行的片層和兩個N端短股片段構(gòu)成。在人體中，CCL5(RANTES)編碼基因位于17q11-21，屬HER2基因編碼區(qū)，目前發(fā)現(xiàn)表達于T淋巴細胞、巨噬細胞、成纖維細胞和一定類型的腫瘤細胞，CCL5與其它趨化性細胞因子類似，可以單體形態(tài)或多聚形態(tài)與對應(yīng)受體結(jié)合。CCL5一般以單體形式存在，高濃度時形成多聚體，不僅具備激活炎性細胞，延長加重炎性反應(yīng)的作用，還可以調(diào)節(jié)細胞的生長和分化，具有趨化性、可增強細胞毒作用并抑制HIV復(fù)制。已發(fā)現(xiàn)的可結(jié)合受體包括CCR1、CCR3、CCR4、CCR5，與CCR5親和性最高為主要作用受體。在炎性反應(yīng)中，CCL5與配體特異結(jié)合，激活下游G蛋白，導(dǎo)致胞內(nèi)鈣離子濃度增加，進一步活化蛋白激酶C，產(chǎn)生相應(yīng)免疫細胞的募集。與大部分趨化因子相同，在不同腫瘤中CCL5發(fā)揮不同作用。研究表明，CCL5在三陰和HER-2陽性乳腺癌腫瘤微環(huán)境中呈現(xiàn)高表達，且其表達量與乳腺癌不良預(yù)后正相關(guān)，及在進展期、遠處轉(zhuǎn)移患者中表達更高，并導(dǎo)致CCL5是II期乳腺癌患者疾病進展的預(yù)測因子的理論，靶向針對CCL5/CCR5的治療研究也取得可喜的進展，類似相關(guān)研究同樣出現(xiàn)在肺癌、霍奇金淋巴瘤、結(jié)腸癌等多種腫瘤中。這一系列研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤中，CCL5/CCR5參與了腫瘤細胞的增殖、血管生成，同時提高基質(zhì)金屬蛋白酶的表達促進腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，提示CCL5為腫瘤進展相關(guān)的重要分子，為腫瘤的防治提供了新的策略。但同樣在黑色素瘤的腫瘤研究中，CCL5的表達與患者預(yù)后正相關(guān)，NK細胞分泌CCL5導(dǎo)致樹突狀細胞的聚集，有利于腫瘤免疫形成和腫瘤自噬。

除了這些CC趨化因子，一些CXC趨化因子也吸引T細胞，且非常具有特異性。如CXCL10(IP-10)和CXCL9(MIG)通過CXCR3受體作用于IL-2激活的T細胞。在病毒感染中，IFN-γ是由效應(yīng)Th1細胞或NK細胞在感染部位產(chǎn)生的，它可能誘導(dǎo)產(chǎn)生CXCL10和CXCL9趨化因子，然后隨后這些趨化因子吸引效應(yīng)細胞毒性T淋巴細胞。