[發明專利]趨化因子聯合檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 202211148135.3
• 申請日: 2022-09-20
• 公開（公告）號: CN115586332A
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發明（設計）人: 陳揚;徐陳槐;潘興鑫;周延慶;汪濤;張現俠
• 申請（專利權）人: 杭州賽基生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/68
• 代理公司: 上海恒銳佳知識產權代理事務所(普通合伙) 31286
• 代理人: 吳浩

1.一種趨化因子聯合檢測試劑盒，其特征在于，包括抗體蛋白和檢測抗體，所述抗體蛋白包括抗人CCL2抗體、抗人CCL5抗體、抗人CXCL9抗體、抗人CXCL10抗體，所述檢測抗體包括CCL2抗體、抗人CCL5抗體、抗人CXCL9抗體、抗人CXCL10抗體。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括固相載體，所述抗體蛋白固定于所述固相載體上。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述固相載體包括酶標板微孔、磁珠、親和膜或液相芯片，所述液相芯片包括微球。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括微球和生物素，每個所述微球與一種抗體蛋白結合形成包被有抗體的微球，每份所述生物素與一種所述檢測抗體偶聯形成生物素偶聯抗體。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括熒光試劑，所述熒光試劑為鏈霉親和素與藻紅蛋白偶聯物。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述抗體偶聯的微球中微球與抗體包被比例為每10⁶個微球上包被10-30ug抗體。

7.根據權利要求1所述的趨化因子檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、洗滌緩沖液、校準品、質控品和基質B所述基質B包括牛血清白蛋白、胎牛血清和甘氨酸。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒采用的信號檢測方法包括可見光顯色法、化學發光法或熒光發光法。

9.一種權利要求1所述試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

在若干份不同的熒光微球中分別加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺和不同抗體后，在室溫下反應4-6小時，然后清洗微球以去除多余抗體后加入脫脂奶粉封閉20-40分鐘，然后去除所述脫脂奶粉，以分別得到不同微球，其中，向不同份熒光微球分別加入的不同抗體分別為CCL2抗體、CCL5抗體、CXCL9抗體和CXCL10抗體，使得到的不同微球分別為包被有抗人CCL2抗體的微球、包被有抗人CCL5抗體的微球、包被有抗人CXCL9抗體的微球和包被有抗人CXCL10抗體的微球；

將制得的所述包被有抗人CCL2抗體的微球、所述包被有抗人CCL5抗體的微球、所述包被有抗人CXCL9抗體的微球和所述包被有抗人CXCL10抗體的微球混合，配制成包被有抗體的微球混合液；

在抗人CCL2抗體、抗人CCL5抗體、抗人CXCL9抗體、抗人CXCL10抗體中分別加入生物素，分別控制抗體與生物素的摩爾比均為1:10-1:40，在室溫下孵育4-6小時后，得到所述生物素偶聯的抗人CCL2抗體、所述生物素偶聯的抗人CCL5抗體、所述生物素偶聯的抗人CXCL9抗體、所述生物素偶聯的抗人CXCL10抗體；

將所述生物素偶聯的抗人CCL2抗體、所述生物素偶聯的抗人CCL5抗體、所述生物素偶聯的抗人CXCL9抗體、所述生物素偶聯的抗人CXCL10抗體混合，配制成生物素偶聯抗體混合液。

10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于，控制制備所述不同微球所使用的各熒光微球的熒光強度各不相同。