[發(fā)明專利]一種快速制備尿激酶原料的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211143608.0
• 申請日: 2022-09-20
• 公開（公告）號: CN115386563A
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顧京;唐維;王德軍;倪萌;李樂楓;金偉;熊倩;趙寶營;曾文;郭芬;熊心磊;丁晶
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省尤里卡生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/72
• 分類號: C12N9/72
• 代理公司: 北京精金石知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 張?zhí)扃?/td>

本發(fā)明公開了一種快速制備尿激酶原料的方法，屬于生物工程及化學(xué)工程領(lǐng)域。所述尿激酶原料的制備方法，包括以下步驟：(1)將尿液中加入改性硅膠進行吸附；(2)用水沖洗改性硅膠，用洗脫液Ⅰ進行洗脫，收集洗脫液；(3)洗脫液中加入硫酸銨，收集沉淀，制得尿激酶粗品；(4)取尿激酶粗品加入磷酸進行溶解，過濾，濃縮得到濃縮液；(5)先用洗脫液Ⅱ平衡吸附柱，再將步驟(4)中得到的濃縮液上吸附柱，再次用洗脫液Ⅱ洗脫吸附柱，收集洗脫液；(6)步驟(5)中得到的洗脫液進行過濾、冷凍干燥后得到尿激酶原料。以上制備方法簡單、生產(chǎn)成本低、收率高、且可快速制備高質(zhì)量尿激酶原料。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程及化學(xué)工程領(lǐng)域，涉及一種快速制備尿激酶原料的方法。

背景技術(shù)

尿激酶簡稱UK，是一種纖溶酶原激活物，由腎臟產(chǎn)生并分泌到尿液中，是一種絲氨酸蛋白酶，能夠特異性的識別纖維蛋白溶酶原，并催化其轉(zhuǎn)變成纖維蛋白溶酶。尿激酶可使不溶的纖維蛋白分解成可溶的小肽，從而使血栓溶解。因此，臨床上常用UK治療急性心肌梗塞、急性腦血栓形成、腦血管栓塞、血栓性閉塞性疾病、肺栓塞以及視網(wǎng)膜中央靜脈血栓形成。人尿源尿激酶主要有天然高分子量尿激酶(54000Dal)和低分子量尿激酶(33000Dal)兩種，高分子量尿激酶溶解血栓的臨床效果比低分子量的尿激酶約高3倍，國際上把尿激酶的相對分子量作為質(zhì)量標準的重要指標之一。

中國專利申請201510549397.4公開了一種制備尿激酶的方法，該方法直接在小便池或便斗中用裝改性硅膠的濾布袋吸附尿液中的尿蛋白，并將吸附尿蛋白的濾布袋運至加工點進行后續(xù)處理的尿蛋白富集方法。本方法利用特定尿蛋白的等電點性質(zhì)，通過使用包括改性硅膠，大孔樹脂，甲殼素，離子樹脂等，對尿胰蛋白酶抑制劑、人尿激肽原酶、尿激酶等尿蛋白直接有效吸附，避免了尿液的收集步驟。該方法對廁所的衛(wèi)生狀況無明顯影響，并大幅度降低了尿液運輸?shù)某杀疽约皫淼囊幌盗协h(huán)境問題。但以上方法中所用的改性硅膠制備方法復(fù)雜，成本高，且得到的尿激酶產(chǎn)品活性較低。

中國專利申請201510549397.4公開了一種尿激酶的制備方法及其凍干粉，具體包括以下步驟：(1)制備尿激酶粗品；(2)制備尿激酶精品；(3)提純。所述步驟(3)中將步驟(2)得到的尿激酶精品溶解后，將尿激酶精品溶液加入陽離子交換層析柱進行提純；將提純后的尿激酶進行凍干即得到尿激酶凍干粉。但以上方法中制備尿激酶粗品使用的是普通的硅膠柱，洗脫效果較差，后續(xù)仍需要較為復(fù)雜的過濾、提純步驟，使得生產(chǎn)工藝更為復(fù)雜，生產(chǎn)成本相對較高。

因此，有必要探索一種制備方法簡單、生產(chǎn)成本低、收率高、可快速制備高質(zhì)量尿激酶原料的方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的提供了一種方法簡單、生產(chǎn)成本低、收率高的快速制備尿激酶原料的方法，該方法得到的尿激酶原料活性較高。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

首先，提供了一種尿激酶原料的制備方法，包括以下步驟：

(1)將尿液中加入改性硅膠進行吸附；

(2)用水沖洗改性硅膠，用洗脫液Ⅰ進行洗脫，收集洗脫液；

(3)洗脫液中加入硫酸銨溶液，攪拌，取上清；再補加硫酸銨，攪拌溶解后，過濾，收集沉淀，制得尿激酶粗品；

(4)取尿激酶粗品加入磷酸進行溶解，過濾，濃縮得到濃縮液；

(5)先用洗脫液Ⅱ平衡吸附柱，再將步驟(4)中得到的濃縮液上吸附柱，再次用洗脫液Ⅱ洗脫吸附柱，收集洗脫液；

(6)步驟(5)中得到的洗脫液進行過濾、冷凍干燥后得到尿激酶原料。

進一步地，步驟(1)中所述改性硅膠為硅烷偶聯(lián)劑改性硅膠、氨基改性硅膠的一種或兩種。