[發明專利]轉基因馬鈴薯PH05-026-0048的實時熒光檢測引物、方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202211131909.1
• 申請日: 2022-09-16
• 公開（公告）號: CN115852020A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 劉二龍;盧麗;關麗軍;李志勇;魏霜;鄭冠津
• 申請（專利權）人: 廣州海關技術中心;黃埔海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了轉基因馬鈴薯PH05?026?0048的實時熒光檢測引物、方法和試劑盒。本發明針對PH05?026?0048轉基因馬鈴薯特異性序列設計引物和探針，建立PH05?026?0048轉基因馬鈴薯特異性實時熒光PCR檢測方法，具有特異性好、靈敏度高、可重復性良好等優點，擴增效率為90％，定量檢測下限為0.01％。有效的解決了現有技術中無PH05?026?0048轉基因馬鈴薯特異性精準定量檢測技術的問題，該方法可應用于進出境口岸檢驗檢疫、國內農業產品食品監管的PH05?026?0048轉基因馬鈴薯及其產品的檢測。

技術領域

本發明屬于轉基因產品檢測領域，具體涉及轉基因馬鈴薯PH05-026-0048實時熒光PCR 檢測引物探針、方法和試劑盒。

背景技術

目前國外上市的轉基因馬鈴薯約47種(ISSSA數據)，轉基因馬鈴薯批準種植或作為食用的國家和地區主要包括美國、加拿大、澳大利亞、日本、韓國、德國、瑞典、捷克、墨西哥等。我國農業部尚未批準轉基因馬鈴薯上市。2017年01月深圳檢出6批次進口薯片含轉基因成分，退運4.8噸(https://www.guancha.cn/society/2017_01_25_391308.shtml)。隨著食品的進口量不斷增大，轉基因馬鈴薯及產品入境風險增高，需要有特異、快速、準確、高通量的檢測技術作為支撐。

馬鈴薯PH05-026-0048是巴斯夫公司研發的抗晚疫病及咪唑啉酮耐受的轉基因馬鈴薯品系。

目前對轉基因產品多數國家均采用相應的標識管理制度，標識管理制度的建立和實施依賴于有效準確的檢測鑒定技術。為打破其他國家和地區設置的轉基因產品貿易技術壁壘，完善我國轉基因產品定量檢測技術體系，保護消費者對轉基因產品的知情權和選擇權，為進出境口岸監管部門提供轉基因馬鈴薯PH05-026-0048檢測鑒定的方法，針對轉基因馬鈴薯 PH05-026-0048構建特異性實時PCR檢測方法。

發明內容：

本發明的目的是提供一種特異性好、靈敏度高、穩定性強，快速準確鑒別轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測引物、探針、方法和試劑盒。

本發明的第一個目的是提供一種轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測引物組，包括檢測引物和檢測探針：

所述的檢測引物如下所示：

PH05-026-0048-3F：5’-GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT-3’(如SEQ ID NO.1所示)；

PH05-026-0048-3R：5’-TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC-3’(如SEQ ID NO.2所示)；

所述的檢測探針如下所示：

PH05-026-0048-3P：5’-AAGTTGTCCTTGGTTTTAT-3’(如SEQ ID NO.3所示)，探針的5’端標記有熒光報告基團，3'端標記有熒光淬滅基團。

所述的熒光報告基團優選為VIC，所述的熒光淬滅基團優選為BHQ1。

本發明的第二個目的是提供一種轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測試劑盒，包括實時熒光定量PCR反應液、耐熱DNA聚合酶、檢測引物和檢測探針：

所述的檢測引物如下所示：

PH05-026-0048-3F：5’-GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT-3’(如SEQ ID NO.1所示)；

PH05-026-0048-3R：5’-TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC-3’(如SEQ ID NO.2所示)；

所述的檢測探針如下所示：