[發明專利]轉基因馬鈴薯PH05-026-0048的實時熒光檢測引物、方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202211131909.1
• 申請日: 2022-09-16
• 公開（公告）號: CN115852020A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 劉二龍;盧麗;關麗軍;李志勇;魏霜;鄭冠津
• 申請（專利權）人: 廣州海關技術中心;黃埔海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

1.一種轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測引物組，包括檢測引物和檢測探針，其特征在于：

所述的檢測引物如下所示：

PH05-026-0048-3F：5’-GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT-3’；

PH05-026-0048-3R：5’-TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC-3’；

所述的檢測探針如下所示：

PH05-026-0048-3P：5’-AAGTTGTCCTTGGTTTTAT-3’，探針的5’端標記有熒光報告基團，3'端標記有熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測引物組，其特征在在于，所述的熒光報告基團為VIC，所述的熒光淬滅基團為BHQ1。

3.一種轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測試劑盒，包括實時熒光定量PCR反應液、耐熱DNA聚合酶、檢測引物和檢測探針，其特征在于：

所述的檢測引物如下所示：

PH05-026-0048-3F：5’-GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT-3’；

PH05-026-0048-3R：5’-TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC-3’；

所述的檢測探針如下所示：

PH05-026-0048-3P：5’-AAGTTGTCCTTGGTTTTAT-3’，探針的5’端標記有熒光報告基團，3'端標記有熒光淬滅基團。

4.根據權利要求3所述的轉基因馬鈴PH05-026-0048薯特異性實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征在在于，所述的熒光報告基團為VIC，所述的熒光淬滅基團為BHQ1。

5.一種轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待測樣品的基因組DNA作為模板；

(2)加入權利要求1所述的檢測引物和檢測探針，與實時熒光定量PCR反應液及耐熱DNA聚合酶混合形成擴增反應體系；

(3)將擴增反應體系在熒光PCR儀上進行實時熒光PCR反應，反應結束后，根據擴增曲線判斷樣品是否為轉基因馬鈴薯PH05-026-0048。

6.根據權利要求5所述的轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，所述的步驟(3)的根據擴增曲線判斷樣品是否為轉基因馬鈴薯PH05-026-0048的標準為：如果擴增曲線有典型熒光擴增曲線，則說明樣品為PH05-026-0048轉基因馬鈴薯；如果擴增曲線無典型熒光擴增曲線，則說明樣品不是轉基因馬鈴薯PH05-026-0048。

7.根據權利要求5所述的轉基因馬鈴薯PH05-026-0048特異性實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，所述的步驟(2)的擴增反應體系為：25μL，包括Premix Ex Taq 12.5μL，ROXReference Dye II 0.2μL，10μmol/L檢測引物PH05-026-0048-3F 0.5μL，10μmol/L檢測引物PH05-026-0048-3R 0.5μL，10μmol/L檢測探針PH05-026-0048-3P 0.5μL，DNA模板2μL和ddH2O 8.8μL；所述的步驟(3)的實時熒光PCR反應，其反應程序為95℃30s；95℃5s、60℃34s，40個循環，于60℃收集熒光信號。