[發明專利]一種絲狀真菌氧化還原指示傳感器及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202211121153.2
• 申請日: 2022-09-15
• 公開（公告）號: CN116286403A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 沈其榮;劉東陽;朱瀚;李馳;李托;劉洋
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/12;C12N15/31;C12N15/65;G01N21/64;C12R1/885
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 吳爽;徐冬濤

1.一種絲狀真菌氧化還原指示傳感器，其特征在于，通過將avGFP蛋白的氨基酸序列的第69位氨基酸由丙氨酸突變成谷氨酰胺，第150位氨基酸由纈氨酸突變成天冬氨酸，并在avGFP的149和202位引入一對半胱氨酸得到。

2.權利要求1所述的絲狀真菌氧化還原指示傳感器的功能性片段的編碼基因，其特征在于，其核苷酸序列如?SEQ?ID?NO.1?所示。

3.權利要求2所述的一種絲狀真菌氧化還原指示傳感器的編碼基因的構建方法，其特征在于，主要通過以下方法構建：以哈茨木霉NJAU?4742的基因組DNA為模板，克隆長度為1308?bp的U3基因片段，基因合成潮霉素B抗性表達片段，以哈茨木霉NJAU?4742的基因組DNA為模板，克隆長度為532bp的U3基因上游同源臂，克隆長度為1663bp的強啟動子片段，以pUC57質粒為模板擴增的氧化還原指示傳感器功能性片段以及長度為1185bp的U3基因下游同源臂，并將6個片段按以上順序，利用融合PCR技術進行融合；優選的，潮霉素B抗性表達片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

4.一種絲狀真菌基因工程菌株，其特征在于，含有權利要求2所述的編碼基因。

5.根據權利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，將權利要求2所述的的編碼基因轉化絲狀真菌所得。

6.根據權利要求5所述的基因工程菌株，其特征在于，所述的轉化方法為原生質體轉化。

7.根據權利要求4-6任一所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌為哈茨木霉NJAU?4742。

8.權利要求1所述的傳感器，權利要求2所述的編碼基因，權利要求4-7任一所述的基因工程菌株，在監測絲狀真菌胞內氧化還原狀態變化中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，通過激光共聚焦成像及熒光強度分析監測絲狀真菌胞內氧化還原狀態的變化。

10.一種監測絲狀真菌胞內氧化還原狀態的方法，其特征在于，將權利要求2所述的編碼基因導入絲狀真菌內。