[發明專利]一種小鼠聽覺神經元永生細胞系及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 202211098985.7 | 申請日： | 2022-09-09 |
| 公開（公告）號： | CN115369095A | 公開（公告）日： | 2022-11-22 |
| 發明（設計）人： | 劉聞聞;王嫚;王海波;王雪 | 申請（專利權）人： | 山東省第二人民醫院（山東省耳鼻喉醫院;山東省耳鼻喉研究所） |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 山東祺智知識產權代理有限公司 37361 | 代理人： | 王增娣 |
| 地址： | 250023 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 小鼠 聽覺 神經元 永生 細胞系 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種小鼠聽覺神經元永生細胞系，其保藏編號為CCTCC NO：C202275。
2.權利要求1所述的小鼠聽覺神經元永生細胞系的構建方法，其特征在于，具體過程為：
（1）C57小鼠聽覺神經元細胞的分離培養：將出生1d的C57小鼠取耳蝸解剖蝸軸并酶解消化，重懸單細胞后鋪瓶培養；
（2）對分離細胞進行免疫熒光鑒定：細胞爬片后進行免疫熒光染色，觀察神經元標記物的染色情況；
（3）采用SV40LT過表達慢病毒轉染C57小鼠聽神經元細胞：利用SV40LT過表達慢病毒載體即EF1α-SV40-IRES-puromycin載體元件轉染螺旋神經節；轉染后，細胞擴增3-4代后進行篩選；
（4）C57小鼠聽神經元細胞的篩選：利用嘌呤霉素篩選轉染成功的細胞；
步驟（1）中所述的酶解采用胰酶與Ⅰ型膠原酶；
上述構建過程中所采用的培養基為含有5%-10%胎牛血清和1μL/ml氨芐青霉素的1640培養基。
3.根據權利要求2所述的小鼠聽覺神經元永生細胞系的構建方法，其特征在于，步驟（1）中所述的酶解選用0.25% 胰酶與0.1%Ⅰ型膠原酶。
4.權利要求1所述的小鼠聽覺神經元永生細胞系的用途，為以下任意一種或幾種：
（1）用于制備聽覺神經元細胞動物模型；
（2）用于開發耳聾藥物靶點；
（3）用于制備耳聾診斷產品；
（4）用于開發或/和篩選或/和評價耳聾治療藥物。
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