[發(fā)明專利]提高副干酪乳桿菌JY062胞外多糖產(chǎn)量的制法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211081420.8
• 申請日: 2022-09-06
• 公開（公告）號: CN115161364B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜毓君;滿朝新;張宇;楊鑫焱;苗超
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12N1/38;C12N1/20;C12R1/225
• 代理公司: 南京群邁知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32690
• 代理人: 安士影

本發(fā)明公開了一種提高副干酪乳桿菌JY062胞外多糖產(chǎn)量的制法，步驟一，從基因?qū)用婧捅硇臀⑸锾荚蠢脤用娲_定副干酪乳桿菌JY062生成胞外多糖可利用的碳源；步驟二，胞外多糖制備工藝優(yōu)化；步驟三，優(yōu)化可利用的碳源。本發(fā)明采用pH為6，以甘露糖、果糖、葡萄糖和半乳糖為復(fù)合碳源的優(yōu)化MRS培養(yǎng)基，34℃下發(fā)酵24h制備胞外多糖。經(jīng)試驗驗證表明，采用此優(yōu)化的制備條件，胞外多糖的產(chǎn)量由7.70g/L提高到13.31g/L，產(chǎn)量提升了72.85％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種提高副干酪乳桿菌JY062胞外多糖產(chǎn)量的制法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

乳酸菌胞外多糖是乳酸菌在生長代謝過程中分泌到細(xì)胞壁外常滲于培養(yǎng)基的一類糖類化合物，是微生物適應(yīng)環(huán)境的產(chǎn)物。近幾十年來，由于微生物胞外多糖在產(chǎn)品結(jié)構(gòu)、性能及生產(chǎn)方面所具有的特別優(yōu)勢而得到大力研究和開發(fā)，微生物胞外多糖的開發(fā)已成為工業(yè)微生物研究的熱點之一。由于乳酸菌是食品級工業(yè)生產(chǎn)菌，與其他菌相比安全性高，所以近年來對乳酸菌胞外多糖的應(yīng)用逐漸增多。乳酸菌胞外多糖可賦予發(fā)酵乳制品特殊的質(zhì)構(gòu)和風(fēng)味，起到安全的食品添加劑的作用，它還能用于食品中以提高食品的增稠性、穩(wěn)定性、乳化性、膠凝性、持水性等。胞外多糖還具有生物活性如免疫活性、抗腫瘤和抗?jié)儯蓱?yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。

由于乳酸菌是食品級工業(yè)生產(chǎn)菌，安全性較高，副干酪乳桿菌屬于乳桿菌屬中的干酪乳桿菌群，廣泛存在于奶酪、泡菜等發(fā)酵食品及人體胃腸道中，具有良好的耐酸及膽汁抗性，能降低血漿中膽固醇，具有促進(jìn)人體腸道內(nèi)病原體的清除、治療腸道菌群紊亂從而防止食物過敏和急性腹瀉、防止腫瘤產(chǎn)生等生理作用。

胞外多糖產(chǎn)量低，是制約胞外多糖大規(guī)模生產(chǎn)的主導(dǎo)因素。乳酸菌胞外多糖的產(chǎn)量易受不同因素影響，其中，近年來研究最多的影響因素有菌株種類、遺傳特性以及發(fā)酵條件。乳酸菌菌種產(chǎn)胞外多糖的能力與菌種的遺傳特性有關(guān)。胞外多糖的產(chǎn)量受到基因調(diào)控，外界環(huán)境的影響對乳酸菌胞外多糖的產(chǎn)量也起到非常重要的作用。培養(yǎng)基組成（碳源）與外界環(huán)境條件（發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、pH）均能顯著影響胞外多糖的生成。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了提供一種提高副干酪乳桿菌JY062胞外多糖產(chǎn)量的制法，該法可顯著提高胞外多糖的產(chǎn)量。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

本發(fā)明公開一種提高副干酪乳桿菌JY062胞外多糖產(chǎn)量的制法，包括以下步驟：

步驟一，從基因?qū)用婧捅硇臀⑸锾荚蠢脤用娲_定副干酪乳桿菌JY062（Lactobacillus paracasei JY062）生成胞外多糖可利用的碳源；

步驟二，胞外多糖制備工藝優(yōu)化；

步驟三，優(yōu)化可利用的碳源。

所述可利用的碳源包括甘露糖、海藻糖、半乳糖、果糖、葡萄糖和乳糖。

所述基因?qū)用娴姆椒椋和ㄟ^基因組分析，確定了副干酪乳桿菌JY062利用PTS磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)將甘露糖、海藻糖、半乳糖和果糖轉(zhuǎn)運到細(xì)胞內(nèi)，葡萄糖和乳糖通過滲透作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。

所述表型微生物碳源利用層面的方法為：將活化后的副干酪乳桿菌JY062菌株在平板上進(jìn)行三區(qū)劃線，固體培養(yǎng)基培養(yǎng)48h后，用Inoculatorz棉簽挑取直徑3mm的菌落到接種液IF3中，配成菌懸液；使用棉簽少量多次蘸取菌落，將菌懸液輕輕攪拌均勻，保證菌懸液不起氣泡，并用濁度儀檢測，調(diào)節(jié)菌懸液的濃度至90-98%T；在Biolog GenIII微孔板中，每孔加入100μL的菌懸液，之后將微孔板直接放入OmniLog的孵育、讀數(shù)儀中，37℃培養(yǎng)48h，分析菌株可利用的碳源。優(yōu)化的胞外多糖制備工藝為：pH為6，34℃下發(fā)酵24h制備胞外多糖。

優(yōu)化后的可利用的碳源包括：等質(zhì)量添加的甘露糖、果糖、葡萄糖和半乳糖。