[發(fā)明專利]一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的拉曼光譜試紙條及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211081330.9
• 申請(qǐng)日: 2022-09-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115524319A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒明強(qiáng);金涌;王玉峰;陳艷;薛強(qiáng);殷宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65;G01N33/543
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種用于檢測(cè)玉米赤霉烯酮的表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫層析試紙條，包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC背襯；

在PVC背襯上依次連續(xù)粘附有樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；

所述結(jié)合墊與所述硝酸纖維素膜之間有搭接，所述硝酸纖維素膜與所述吸水墊之間有搭接；所述結(jié)合墊上包被有Au-DTNB@Ag-玉米赤霉烯酮抗體溶液，所述硝酸纖維素膜上分別包被有構(gòu)成檢測(cè)線的玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白（BSA）偶聯(lián)物和構(gòu)成質(zhì)控線的兔抗鼠IgG。

2.權(quán)利要求1所述的表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）制備納米金顆粒溶液：稱取氯金酸溶于超純水中，得氯金酸溶液，加熱，待氯金酸溶液98℃時(shí)加入檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)加熱后，冷卻，得納米金顆粒溶液（AuNPs）；

（2）制備納米金顆粒表面修飾DTNB溶液：取步驟（1）制備的納米金顆粒溶液，加入DTNB溶液，攪拌反應(yīng)，離心，去除上清液，沉淀用超純水混懸，得AuNPs-DTNB溶液；

（3）銀包裹AuNPs-DTNB核殼結(jié)構(gòu)的制備：取步驟（2）制備的AuNPs-DTNB溶液和AgNO3溶液混合，反應(yīng)，離心，沉淀用超純水混懸，超聲分散，得銀包裹AuNPs-DTNB核殼復(fù)合物（Au-DTNB@Ag）溶液；

（4）拉曼免疫探針制備：取步驟（3）制備的Au-DTNB@Ag溶液，加入碳酸鉀溶液，再向溶液中加入玉米赤霉烯酮抗體，反應(yīng)后，加入BSA溶液，反應(yīng)，離心，沉淀用保存液混懸，得拉曼免疫探針（Au-DTNB@Ag-Ab）溶液；

（5）結(jié)合墊的包被：將結(jié)合墊浸泡于磷酸緩沖液后，將步驟（4）制備的Au-DTNB@Ag-Ab溶液均勻包被在結(jié)合墊上，封裝備用；

（6）樣品墊的處理：將樣品墊浸泡于磷酸鹽緩沖液，封裝備用；

（7）硝酸纖維素膜的包被：用磷酸鹽緩沖液將玉米赤霉烯酮-BSA偶聯(lián)物稀釋，包被于硝酸纖維素膜作為檢測(cè)線；用磷酸鹽緩沖液將兔抗鼠IgG抗體稀釋，包被于硝酸纖維素膜作為質(zhì)控線，封裝備用；

（8）試紙條的組裝。

3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述氯金酸、超純水、檸檬酸三鈉溶液的質(zhì)量體積比為0.01 g：100 mL：2.5 mL；所述加熱的條件為：油浴鍋98℃中邊攪拌邊加熱；所述檸檬酸三鈉質(zhì)量濃度為1%；所述繼續(xù)加熱的時(shí)間為10 min；所述冷卻至20~25℃。

4.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）所述納米金顆粒溶液、DTNB溶液、超純水的體積比為10 mL：20 μL：2 mL；所述DTNB溶液濃度為0.01 mol/L；所述攪拌反應(yīng)的溫度為20~25℃，時(shí)間為2 h；所述離心為12000 rpm，時(shí)間10 min。

5.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）所述AuNPs-DTNB溶液、AgNO3溶液體積比為2 mL：0.6 mL；所述AgNO3溶液濃度為0.01 mol/L，反應(yīng)條件為：20~25℃，時(shí)間為30 min；所述離心：8000 rpm，時(shí)間10 min；所述超純水的用量為2 mL；所述超聲分散：500w。

6.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（4）所述Au-DTNB@Ag溶液、碳酸鉀溶液、玉米赤霉烯酮抗體的體積質(zhì)量比為1 mL：6 μL：10 μg；所述碳酸鉀溶液的濃度為0.05mol/L；所述BSA溶液質(zhì)量濃度為10%，并調(diào)節(jié)終濃度至1%；所述反應(yīng)均為：攪拌反應(yīng)，時(shí)間30min；所述離心：4℃，10000 rpm，時(shí)間10 min；所述保存液：0.02 mol/L硼酸鈉緩沖液（pH7.4），含質(zhì)量濃度為2% BSA，質(zhì)量濃度為0.25% Proclin-300。

7.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（5）所述磷酸緩沖液：0.0l M，pH7.4，浸泡時(shí)間30 min，浸泡后于37℃烘干；所述Au-DTNB@Ag-Ab溶液經(jīng)20倍稀釋，包被在結(jié)合墊上，包被后還包括37℃烘干。