[發(fā)明專利]一種Cas12a變體及其在基因編輯中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211079655.3
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN116042571A
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 殷雷;周進;陳鵬;王宏建;劉歡;方嘉凌
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/113;C12N15/861;C12N15/867;C12N5/10;C12N7/01
• 代理公司: 武漢科皓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 江慧

1.一種Cas12a變體，其特征在于，所述Cas12a變體為LbCas12a-K538R，氨基酸序列如SED?ID?NO.2所示。

2.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體表達權(quán)利要求1所述的Cas12a變體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包括質(zhì)粒載體、病毒載體和噬菌體載體中的一種。

4.一種重組菌或重組細(xì)胞系或重組病毒，其特征在于，包含權(quán)利要求2所述的重組表達載體。

5.一種重組病毒，其特征在于，所述重組病毒采用權(quán)利要求3所述的病毒載體包裝獲得，所述重組病毒包括表達權(quán)利要求1所述的Cas12a變體的腺病毒或慢病毒。

6.一種權(quán)利要求1所述的Cas12a變體、權(quán)利要求2-3任一所述的重組表達載體、權(quán)利要求4所述的重組菌或重組細(xì)胞系和權(quán)利要求5所述的重組病毒在基因編輯中的應(yīng)用。

7.一種包括權(quán)利要求1所述Cas12a變體的CRISPR/Cas12a基因編輯系統(tǒng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的CRISPR/Cas基因編輯系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)還包括：靶向目標(biāo)基因的crRNA或crDNA。

9.一種對受體中的目的基因進行基因編輯的方法，其特征在于，借助CRISPR/Cas12a系統(tǒng)對受體中的目的基因進行基因編輯，所述方法包括：

通過將權(quán)利要求2-3任一所述的重組表達載體導(dǎo)入受體提供Cas12a變體；

通過靶向目標(biāo)基因的crRNA或crDNA質(zhì)粒導(dǎo)入受體提供crRNA；

所述Cas12a變體和所述crRNA在受體中形成復(fù)合物識別目的基因并完成編輯。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種對受體中的目的基因進行基因編輯的方法，其特征在于，所述受體包括293T細(xì)胞、ATDC5細(xì)胞和C6細(xì)胞中的一種。