[發(fā)明專利]2-戊酰基芐腈還原酶突變體及在制備光學(xué)純丁苯酞中的應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202211072770.8 | 申請日： | 2022-09-02 |
| 公開（公告）號： | CN115927227A | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 白云鵬;宋渴明;張曉彥 | 申請（專利權(quán)）人： | 華東理工大學(xué) |
| 主分類號： | C12N9/04 | 分類號： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海科盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明偉 |
| 地址： | 200237 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 戊酰基芐腈 還原酶 突變體 制備 光學(xué) 純丁苯酞 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種2-戊酰基芐腈還原酶突變體，其特征在于，將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺、第92位天冬氨酸、183位酪氨酸、90位蘇氨酸、127位賴氨酸中的一個或多個氨基酸殘基替換為其它氨基酸殘基所形成的新氨基酸序列的衍生蛋白質(zhì)，所述衍生蛋白質(zhì)具有高于SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的催化性能和熱穩(wěn)定性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種2-戊酰基芐腈還原酶突變體，其特征在于，所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體的氨基酸序列選自下列序列中的任一種：
(1)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺替換為精氨酸；
(2)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第92位天冬氨酸替換為酪氨酸；
(3)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第183位酪氨酸替換為亮氨酸；
(4)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第90位蘇氨酸替換為蛋氨酸；
(5)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第127位賴氨酸替換為精氨酸；
(6)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺替換為精氨酸，第92位天冬氨酸替換為酪氨酸；
(7)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺替換為精氨酸，第92位天冬氨酸替換為酪氨酸，第183位酪氨酸替換為亮氨酸；
(8)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺替換為精氨酸，第92位天冬氨酸替換為酪氨酸，第183位酪氨酸替換為亮氨酸，第90位蘇氨酸替換為蛋氨酸；
(9)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺替換為精氨酸，第92位天冬氨酸替換為酪氨酸，第183位酪氨酸替換為亮氨酸，第127位賴氨酸替換為精氨酸；
(10)將如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的第145位天冬酰胺替換為精氨酸，第92位天冬氨酸替換為酪氨酸，第183位酪氨酸替換為亮氨酸，第90位蘇氨酸替換為蛋氨酸，第127位賴氨酸替換為精氨酸。
3.一種分離的核酸，其特征在于，所述的核酸編碼如權(quán)利要求1或2所述的2-戊酰基芐腈還原酶突變體。
4.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體包含如權(quán)利要求3所述的核酸。
5.一種重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，其特征在于，所述重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體包含如權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)載體。
6.一種重組2-戊酰基芐腈還原酶突變體催化劑，其特征在于，所述的重組2-戊酰基芐腈還原酶突變體催化劑是以下形式中的任意一種：
(1)培養(yǎng)如權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，分離含有所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體的轉(zhuǎn)化體細(xì)胞；
(2)培養(yǎng)如權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，分離含有所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體的粗酶液；
(3)將所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體的粗酶液干燥得到的粗酶粉。
7.一種如權(quán)利要求1或2所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體，或權(quán)利要求6所述重組2-戊酰基芐腈還原酶突變體催化劑在不對稱還原2-戊酰基芐腈化合物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體或重組2-戊酰基芐腈還原酶突變體催化劑在不對稱還原2-戊酰基芐腈化合物的過程中，在葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、輔酶NADPH或NADP+存在的情況下進(jìn)行。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述葡萄糖脫氫酶的用量為50～200U/mmol?2-戊酰基芐腈化合物，所述葡萄糖的用量為2-戊酰基芐腈化合物摩爾量的1.5倍，所述輔酶NADPH或NADP+的用量為0.1～0.5mmol/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述2-戊酰基芐腈化合物的濃度為2～20mmol/L，所述2-戊酰基芐腈還原酶突變體或所述重組2-戊酰基芐腈還原酶突變體催化劑的用量為5～20U/mmol?2-戊酰基芐腈化合物。
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