[發(fā)明專利]氨酰-tRNA合酶突變體及烯基酪氨酰-tRNA的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202211072207.0 | 申請日： | 2022-09-02 |
| 公開（公告）號： | CN115717130A | 公開（公告）日： | 2023-02-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 洪浩;詹姆斯·蓋吉;肖毅;張娜;焦學(xué)成;趙軍旗;王姝玉 | 申請（專利權(quán)）人： | 凱萊英醫(yī)藥集團（天津）股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/00 | 分類號： | C12N9/00;C12N15/52;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/34;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240 | 代理人： | 白雪 |
| 地址： | 300457 天津市*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 氨酰 trna 突變體 烯基酪氨酰 制備 方法 | ||
本發(fā)明提供了一種氨酰?tRNA合酶突變體及烯基酪氨酰?tRNA的制備方法。其中，氨酰?tRNA合酶突變體包括：SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列發(fā)生突變的蛋白，所述突變選自N160突變以及A31、L32、L65、A67、L69、S107、F108、Q109、L110、P158、L159、Y161、E162中的任意一種或多種突變。能夠特異性高的識別酪氨酸衍生物，催化酪氨酸衍生物與相應(yīng)的tRNA結(jié)合，形成烯基酪氨酰?tRNA，適用于酶催化領(lǐng)域。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及酶催化領(lǐng)域，具體而言，涉及一種氨酰-tRNA合酶突變體及烯基酪氨酰-tRNA的制備方法。
背景技術(shù)
烯丙基在有機合成中有著廣泛的應(yīng)用，可以參與復(fù)分解，Diels-Alder反應(yīng)(雙烯加成反應(yīng))，1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)(1，3-Dipolar Cycloaddition)，已經(jīng)被用于氨基酸衍生物交聯(lián)反應(yīng)和環(huán)肽合成。烯丙基-L-酪氨酸(O-allyl-L-tyrosine，OAY)作為一種重要的非天然氨基酸，引入蛋白或者多肽中，進一步通過化學(xué)反應(yīng)和其他的官能團發(fā)生反應(yīng)，從而可以實現(xiàn)蛋白標記、蛋白和其他分子偶聯(lián)的目的。通過正交的tRNA，氨酰-tRNA合成酶(aaRS)和琥珀密碼子(TAG)來實現(xiàn)非天然氨基酸的引入已被證實是一種高效可行的方案，然而由于引入的非天然氨基酸多是天然氨基酸的衍生物，導(dǎo)致特異性不強。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供一種氨酰-tRNA合酶突變體及烯基酪氨酰-tRNA的制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中蛋白質(zhì)引入酪氨酸衍生物特異性差的問題。
為了實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，提供了一種氨酰-tRNA合酶突變體，包括：SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列發(fā)生突變的蛋白，突變選自N160突變以及如下任意一種或多種突變：A31突變?yōu)锳31S、A31G、A31C、A31T或A31L；L32突變?yōu)長32G、L32S、L32C、L32T、L32V、L32A或L32I；L65突變?yōu)長65V、L65T、L65C或L65I；A67突變?yōu)锳67S；L69突變?yōu)長69S、L69V或L69I；S107突變?yōu)镾107R、S107A或S107T；F108突變?yōu)镕108S、F108H或F108W；Q109突變?yōu)镼109G、Q109S、Q109V或Q109N；L110突變?yōu)長110R、L110Y、L110K、L110I或L110V；P158突變?yōu)镻158A、P158L、P158S、P158D或P158M；L159突變?yōu)長159T、L159Q、L159E、L159V、L159D、L159I或L159A；Y161突變?yōu)閅161M、Y161Q、Y161N、Y161S、Y161W或Y161F；E162突變?yōu)镋162V、E162M、E162L、E162T、E162I或E162D；N160突變?yōu)镹160S、N160G、N160E、N160F、N160D、N160A、N160I、N160M、N160H或N160V。
進一步地，氨酰-tRNA合酶突變體選自以SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列為基礎(chǔ)發(fā)生如下任一種組合突變的突變體，
1)A31S+L32G+P158A+L159T+N160S+Y161M+E162V；
2)A31G+L32S+L65V+L69S+S107R+F108S+Q109G+L110R+P158L+L159Q+N160G+Y161Q+E162M；
3)A31G+L32C+P158S+L159E+N160E+Y161N+E162L；
4)A31C+L32T+P158S+L159Q+N160F+Y161S+E162T；
5)A31G+L32V+L65T+A67S+S107A+F108H+Q109S+L110Y+P158D+L159V+N160D+Y161Q+E162I；
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