[發明專利]氨酰-tRNA合酶突變體及烯基酪氨酰-tRNA的制備方法

在審

• 申請號: 202211072207.0
• 申請日: 2022-09-02
• 公開（公告）號: CN115717130A
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 洪浩;詹姆斯·蓋吉;肖毅;張娜;焦學成;趙軍旗;王姝玉
• 申請（專利權）人: 凱萊英醫藥集團（天津）股份有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/34;C12R1/19
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 白雪

1.一種氨酰-tRNA合酶突變體，其特征在于，包括：

SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列發生突變的蛋白，所述突變選自N160突變以及如下任意一種或多種突變：

A31突變為A31S、A31G、A31C、A31T或A31L；

L32突變為L32G、L32S、L32C、L32T、L32V、L32A或L32I；

L65突變為L65V、L65T、L65C或L65I；

A67突變為A67S；

L69突變為L69S、L69V或L69I；

S107突變為S107R、S107A或S107T；

F108突變為F108S、F108H或F108W；

Q109突變為Q109G、Q109S、Q109V或Q109N；

L110突變為L110R、L110Y、L110K、L110I或L110V；

P158突變為P158A、P158L、P158S、P158D或P158M；

L159突變為L159T、L159Q、L159E、L159V、L159D、L159I或L159A；

Y161突變為Y161M、Y161Q、Y161N、Y161S、Y161W或Y161F；

E162突變為E162V、E162M、E162L、E162T、E162I或E162D；

所述N160突變為N160S、N160G、N160E、N160F、N160D、N160A、N160I、N160M、N160H或N160V。

2.根據權利要求1所述的氨酰-tRNA合酶突變體，其特征在于，所述氨酰-tRNA合酶突變體選自以SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列為基礎發生如下任一種組合突變的突變體，

1)A31S+L32G+P158A+L159T+N160S+Y161M+E162V；

2)A31G+L32S+L65V+L69S+S107R+F108S+Q109G+L110R+P158L+L159Q+N160G+Y161Q+E162M；

3)A31G+L32C+P158S+L159E+N160E+Y161N+E162L；

4)A31C+L32T+P158S+L159Q+N160F+Y161S+E162T；

5)A31G+L32V+L65T+A67S+S107A+F108H+Q109S+L110Y+P158D+L159V+N160D+Y161Q+E162I；

6)A31T+L32V+L65C+L69V+S107A+F108S+Q109V+L110K+P158M+L159T+N160G+Y161W+E162T；

7)L32S+L159D+N160A+Y161S+E162T；

8)N160H+L32V+S107T+Q109N+L110I+L159I；

9)N160H+L32A；

10)N160H+L32V；

11)N160H+L32I+L65V+A67S+S107T+F108W+L110R+P158A+L159D+E162D；

12)N160H+A31L+L32A+L65I+L69I+L110V+L159A+Y161F。

3.一種DNA分子，其特征在于，所述DNA分子編碼權利要求1或2所述的氨酰-tRNA合酶突變體。

4.一種重組質粒，其特征在于，所述重組質粒連接有權利要求3所述的DNA分子。

5.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞內含有權利要求3所述的DNA分子、或權利要求4所述的重組質粒。

6.根據權利要求5所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞包括原核細胞；

優選地，所述原核細胞包括大腸桿菌。

7.一種烯基酪氨酰-tRNA的制備方法，其特征在于，利用權利要求1或2所述的氨酰-tRNA合酶突變體，催化烯基酪氨酸和tRNA結合，制備獲得所述烯基酪氨酰-tRNA，所述烯基酪氨酸為非天然氨基酸。