[發明專利]一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202211063471.8
• 申請日: 2022-09-01
• 公開（公告）號: CN116162153A
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 方鐘;李亞明;陳捷亮;阿說阿沙
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;G01N33/576;G01N33/577;A61K39/42;A61P31/20
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 杜焱

本發明公開了一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體及其應用，通過抗原免疫小鼠，篩選得到表達乙肝表面抗體的雜交瘤細胞株。所述單克隆抗體的重鏈可變區的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.1～3所示，其輕鏈可變區的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.4、KVS、SEQ?ID?NO.5所示；上述單克隆抗體可用于Western?blot檢測真核細胞來源的HBsAg、不同基因型的HBsAg和HBsAg突變體，適用于檢測多種類型的樣本，為乙肝病毒的檢測及乙肝疾病的治療開拓了新的方法。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，尤其涉及一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體及其應用。

背景技術

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。鑒于單克隆抗體的以上特征，其已經迅速用于醫學的眾多領域，如作為檢驗醫學實驗室的診斷試劑，用于酶聯免疫吸附試驗、免疫組化、流式細胞術等技術，蛋白質純化抑或腫瘤的導向治療和放射免疫顯像技術。但單克隆抗體也存在局限性，如當用免疫印跡方法(Western?blot)檢測病毒蛋白時，識別病毒抗原的抗體往往識別的是抗原上的構象表位，因此單克隆抗體難以應用于Western?Blot檢測。

乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)引起的急性和慢性感染是嚴重危害人類健康的全球性的公共衛生問題。隨著乙肝疫苗的接種，極大的控制了病毒蔓延。但我國仍是世界上乙型肝炎患者最多的國家。目前臨床中用于治療慢乙肝的藥物，包括干擾素和核苷/核苷酸類似物，雖然可以有效抑制HBV復制，但無法徹底清除病毒，并可能出現耐藥性。

乙肝表面抗原-HBsAg，不僅作為HBV的包膜蛋白參與完整病毒顆粒的行程，還會和宿主脂質組成非感染性亞病毒顆粒，即HBsAg顆粒，有大、中、小三種形式。其中小HBsAg由226個氨基酸編碼，是引起機體產生保護性抗體的主要組成部分，其中有一個免疫優勢區稱為“a”抗原決定簇，位于124位-147位氨基酸。HBsAg上有4個跨膜區，“a”抗原決定簇位于跨膜區2和跨膜區3之間暴露于病毒顆粒表面，是現有HBsAg相關抗體主要選擇的免疫性反應片段。由于HBV慢性感染過程中，經過自然選擇、適者生存的時間和空間壓力，會出現一系列的突變株，而上述“a”抗原決定簇是HBsAg發生突變頻率較高的區域。因此針對該區域的HBsAg抗體能否與發生突變的HBsAg結合，是否能涵蓋所有類型的突變，都存在問題。

當前對HBV的科研研究和臨床檢測中，HBsAg的檢測是衡量HBV復制的重要指標。目前，商品化的HBsAg?ELISA試劑盒可以滿足臨床中檢測血清及其他體液中HBsAg和科研上檢測細胞上清中HBsAg水平。涉及HBsAg的ELISA檢測抗體多識別HBsAg的空間構象表位，極少識別HBsAg的線性表位。當前市面上缺少有效、簡單并準確地用于Western?blot檢測HBsAg蛋白水平的HBsAg抗體。

發明內容

本發明提供了一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體及其應用，以解決現有技術的上述問題。

本發明的方案是：

一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體，單克隆抗體包括重鏈可變區與輕鏈可變區；

所述重鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列組成的重鏈互補決定區HCDR1、如SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列組成的重鏈互補決定區HCDR2與如SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列組成的重鏈互補決定區HCDR3；

所述輕鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列組成的輕鏈互補決定區LCDR1、氨基酸序列為KVS的輕鏈互補決定區LCDR2與如SEQ?ID?NO.5所示的氨基酸序列組成的輕鏈互補決定區LCDR3。