[發明專利]一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202211063471.8
• 申請日: 2022-09-01
• 公開（公告）號: CN116162153A
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 方鐘;李亞明;陳捷亮;阿說阿沙
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;G01N33/576;G01N33/577;A61K39/42;A61P31/20
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 杜焱

1.一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體，其特征在于：單克隆抗體包括重鏈可變區與輕鏈可變區；

所述重鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列組成的重鏈互補決定區HCDR1、如SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列組成的重鏈互補決定區HCDR2與如SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列組成的重鏈互補決定區HCDR3；

所述輕鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列組成的輕鏈互補決定區LCDR1、氨基酸序列為KVS的輕鏈互補決定區LCDR2與如SEQ?ID?NO.5所示的氨基酸序列組成的輕鏈互補決定區LCDR3。

2.如權利要去1所述一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示或與序列如SEQ?ID?NO.6相似性≥80％的氨基酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.7所示或與序列如SEQ?ID?NO.7相似性≥80％的氨基酸序列。

3.如權利要求1所述的一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體還包括重鏈恒定區和輕鏈恒定區。

4.如權利要求2所述的一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體，其特征在于：所述與序列如SEQ?ID?NO.6相似性≥80％的氨基酸序列組成的蛋白與參照序列序列SEQ?ID?NO.6相比包含突變如缺失、插入或取代；所述與序列如SEQ?ID?NO.7相似性≥80％的氨基酸序列組成的蛋白與參照序列序列SEQ?ID?NO.7相比包含突變如缺失、插入或取代；所述取代的情況中，由與參照序列SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7的80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％與99％相同的氨基酸序列組成的蛋白對應源自不同于參照序列的物種的同源序列；所述取代包括保守取代與非保守取代，所述保守取代為其中一個氨基酸由具有相似結構和/或化學性質的另一氨基酸取代。

5.一種制備如權利要求1所述的乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體的方法，其特征在于，包括下列步驟：

以CHO表達的HBsAg蛋白對balb/c小鼠進行三次免疫，每次以100μg蛋白混合等體積弗氏佐劑，多點注射小鼠腹腔；第三次免疫后兩周，取小鼠脾臟細胞與骨髓瘤細胞系SP2/0進行融合，再經過有限稀釋法培養在96孔細胞培養板中，兩周后取培養上清，做Western?Blot檢測，最終篩選得到一株細胞克隆獲得的抗體S1705，其檢測到HBsAg蛋白。

6.一種如權利要求1所述的乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體相關的生物材料，其特征在于，所述生物材料選自下述A)～D)中的其中一種：

A)編碼所述單克隆抗體的核酸分子；

B)含有A)中所述核酸分子的表達盒、重組載體、重組細胞系；

C)所述單克隆抗體所識別的抗原肽；

D)所述單克隆抗體的衍生體；

編碼所述HCDR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示，編碼所述HCDR2的核苷酸序列如SEQID?NO.9所示，編碼所述HCDR3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示，編碼所述LCDR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示，編碼所述LCDR2的核苷酸序列為如SEQ?ID?NO.16所示，編碼所述LCDR3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示。

編碼所述重鏈可變區的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13所示，編碼所述輕鏈可變區的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.14所示；所述抗原肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.15所示。

7.如權利要求6所述的一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體相關的生物材料，其特征在于：載體為質粒、黏粒、噬菌體與病毒載體其中的一種。

8.如權利要求6所述的一種乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體相關的生物材料，其特征在于：所述單克隆抗體的衍生體包括抗體Fab片段、單鏈抗體或其融合抗體其中的一種，所述衍生體均可采用本領域常規方法制備。