[發明專利]一種生物標志物IL-8的Simoa試劑盒及其應用和使用方法

在審

• 申請號: 202211060324.5
• 申請日: 2022-08-31
• 公開（公告）號: CN115561459A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 鐘惠嫻;陳培林;陳露平;孫青;刁梁輝;熊風;曾勇
• 申請（專利權）人: 深圳中山泌尿外科醫院;深圳市錦欣醫療科技創新中心有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發明公開了一種生物標志物IL?8的單分子免疫陣列檢測(Simoa)試劑盒，其包括捕獲抗體包被的磁珠、已知濃度的IL?8標準品溶液、生物素化的檢測抗體；捕獲抗體包括單克隆抗體10098?MM05；檢測抗體包括單克隆抗體10098?MM18；IL?8標準品包括10098?H08Y。本發明通過篩選新的IL?8抗體對及標準品，制備出一種IL?8的Simoa試劑盒，相比于現有高靈敏度的技術，其靈敏度提高4?10倍。用于檢測單囊胚條件培養液中IL?8含量時，靈敏度幾乎滿足單囊胚條件培養液中超低濃度的IL?8定量檢測的需求；該試劑盒可結合Simoa儀器使用，通過全自動檢測儀器，解決手工操作依賴問題，使得檢測結果具備良好的重復性和準確性。

技術領域

本發明涉及蛋白檢測技術及生殖醫學領域，具體而言，涉及一種生物標志物IL-8的Simoa試劑盒及其應用和使用方法。

背景技術

在過去幾十年里，人類輔助生殖技術得到重大發展。為提高胚胎種植率以及降低多胎妊娠率，選擇高質量的單囊胚進行胚胎移植逐漸成為趨勢。目前，在全球范圍內，胚胎實驗室通常利用傳統的形態學評分方法選擇移植的胚胎，但其主觀性較強、準確性較差。因此，如何挑選更具有發育潛能的胚胎是一直困擾臨床醫生及胚胎學家的難題。胚胎發育過程中存在著廣泛的蛋白分泌現象，其表達與分泌體現了機體的生理狀態，有研究表明，白細胞介素-8(IL-8)在子宮內膜容受前期和容受期時表達明顯增高，胚胎移植成功后胚胎植入部位的趨化因子和前炎癥細胞因子水平與IVF/ICSI患者的臨床結局成正相關，胚胎植入部位的趨化因子和前炎癥細胞因子是胚胎成功種植的關鍵。因此，希望通過檢測胚胎分泌蛋白IL-8來預測胚胎的發育潛能。

目前臨床上使用的IL-8檢測方法有傳統酶聯免疫吸附法(ELISA)，但由于單胚胎條件培養液體積小(25μL)，且蛋白豐度極低(fg/mL)，ELISA技術無法定量檢測單胚胎條件培養液中的IL-8水平；另外，Quanterix公司研發了一種關于檢測IL-8含量的單分子免疫陣列檢測(Simoa)試劑盒，配合Quanterix HD-X儀器可以使靈敏度得到提高，但是其僅能定量檢測部分單胚胎條件培養液樣品中的IL-8含量(高于定量限的樣品占所有樣品的30-50％)，靈敏度仍然達不到定量檢測要求。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種生物標志物IL-8的Simoa試劑盒及其應用和使用方法，該試劑盒能夠提高靈敏度進而實現IL-8含量極低的樣品的定量檢測。

本發明是這樣實現的：

本發明提供一種生物標志物IL-8的Simoa試劑盒，其包括捕獲抗體包被的磁珠、IL-8標準品、生物素化的檢測抗體、鏈霉親和素-β-半乳糖苷酶溶液、熒光底物溶液和樣品稀釋液；

捕獲抗體包括單克隆抗體10098-MM05；檢測抗體包括單克隆抗體10098-MM18；IL-8標準品包括10098-H08Y。

在可選的實施方式中，捕獲抗體包被的磁珠的制備方法包括：將捕獲抗體用磁珠偶聯緩沖液進行液體置換處理，并將磁珠進行活化，然后將置換后的捕獲抗體與活化磁珠偶聯，偶聯產物經過清洗液清洗后，用封閉緩沖液封閉，再用清洗液清洗后即獲得捕獲抗體包被的磁珠。

在可選的實施方式中，活化磁珠步驟中的活化條件為：活化溫度2-8℃，活化時間20-40min。

在可選的實施方式中，活化磁珠步驟中的活化試劑包括EDC溶液，EDC溶液濃度為0.1-0.5mg/mL。

在可選的實施方式中，偶聯步驟中的偶聯條件為：偶聯溫度2-8℃，偶聯時間1.5-2.5h。

在可選的實施方式中，偶聯步驟中活化磁珠的濃度為1.3×10⁹-1.5×10⁹個/mL；置換后的捕獲抗體的濃度為0.1-0.3mg/mL。