[發明專利]一種生物標志物IL-8的Simoa試劑盒及其應用和使用方法

在審

• 申請號: 202211060324.5
• 申請日: 2022-08-31
• 公開（公告）號: CN115561459A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 鐘惠嫻;陳培林;陳露平;孫青;刁梁輝;熊風;曾勇
• 申請（專利權）人: 深圳中山泌尿外科醫院;深圳市錦欣醫療科技創新中心有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

1.一種生物標志物IL-8的Simoa試劑盒，其特征在于，包括捕獲抗體包被的磁珠、已知濃度的IL-8標準品、生物素化的檢測抗體；

所述捕獲抗體包括單克隆抗體10098-MM05；所述檢測抗體包括單克隆抗體10098-MM18；所述IL-8標準品包括10098-H08Y。

2.根據權利要求1所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述捕獲抗體包被的磁珠的制備方法包括：將所述捕獲抗體用磁珠偶聯緩沖液進行液體置換處理，并將所述磁珠進行活化，然后將置換后的捕獲抗體與活化磁珠偶聯，偶聯產物經過清洗液清洗后，用封閉緩沖液封閉，再用清洗液清洗后即獲得捕獲抗體包被的磁珠。

3.根據權利要求2所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述活化磁珠步驟中的活化條件為：活化溫度2-8℃，活化時間20-40min。

4.根據權利要求3所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述活化磁珠步驟中的活化試劑包括EDC溶液，所述EDC溶液濃度為0.1-0.5mg/mL。

5.根據權利要求2所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述偶聯步驟中的偶聯條件為：偶聯溫度2-8℃，偶聯時間1.5-2.5h。

6.根據權利要求5所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述偶聯步驟中活化磁珠的濃度為1.3×10⁹-1.5×10⁹個/mL；所述置換后的捕獲抗體的濃度為0.1-0.3mg/mL。

7.根據權利要求1所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述生物素化的檢測抗體的制備方法包括：將所述檢測抗體用生物素化反應緩沖液進行液體置換處理，然后將置換后的捕獲抗體與生物素連接，得到的產物經過純化處理后即獲得生物素化的檢測抗體；

優選地，所述生物素包括生物素四聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺酯；

優選地，所述檢測抗體與生物素的摩爾比為1：30-1：50。

8.根據權利要求1所述的Simoa試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括鏈霉親和素-β-半乳糖苷酶溶液和熒光底物溶液；

優選地，所述熒光底物包括試鹵靈-β-D-半乳糖苷。

9.如權利要求1-8任一項所述的Simoa試劑盒在檢測胚胎條件培養液中IL-8蛋白中的應用。

10.如權利要求1-8任一項所述的Simoa試劑盒的使用方法，其特征在于，包括：將所述IL-8捕獲抗體包被的磁珠溶液、生物素化的IL-8檢測抗體溶液、鏈霉親和素-β-半乳糖苷酶溶液、熒光底物溶液、以及加有已知濃度的標準品、質控品和樣品的96孔板加載進儀器，運行試驗后導出擬合曲線及樣品檢測結果；其中，所述質控品由所述已知濃度的IL-8標準品稀釋制得。