[發(fā)明專利]一種細(xì)胞骨架實驗樣品的快速制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211058297.8
• 申請日: 2022-08-30
• 公開（公告）號: CN115524185A
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮世坤;周瑞芝;李慧
• 申請（專利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N1/34;G01N1/44
• 代理公司: 新鄉(xiāng)市平原智匯知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41139
• 代理人: 郝懷慶

本發(fā)明公開了一種細(xì)胞骨架實驗樣品的快速制備方法，撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，加入磷酸鹽緩沖液，待洋蔥鱗莖內(nèi)表皮下沉后，微波處理；吸去磷酸緩沖液，加入抽提劑1wt%Triton X?100溶液覆蓋洋蔥樣品，微波處理；吸去抽提劑，用M?緩沖液浸泡洗滌，微波處理；吸去M?緩沖液，加入固定液3wt%戊二醛溶液覆蓋洋蔥樣品，微波處理；吸去固定液，用磷酸鹽緩沖液浸泡洗滌，微波處理；吸去磷酸鹽緩沖液，加0.2wt%考馬斯亮藍(lán)R250染液微波處理；用蒸餾水沖洗去除浮液，加蓋玻片觀察。本發(fā)明采用微波處理后整個實驗過程可以縮短到2個小時內(nèi)完成，處理后細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)清晰、完整，整體操作簡單，可以在本科實驗中推廣使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞骨架實驗樣品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞骨架實驗樣品的快速制備方法。

背景技術(shù)

細(xì)胞骨架是在真核細(xì)胞內(nèi)部可觀察到的纖維狀的網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，細(xì)胞骨架主要包括微管、微絲和中間纖維。細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞運(yùn)動、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)纫幌盗蟹矫婢兄匾饔茫虼耍?xì)胞骨架是近代細(xì)胞生物學(xué)研究最活躍的領(lǐng)域之一，也是細(xì)胞生物學(xué)實驗的重要內(nèi)容。

近年來，不斷有學(xué)者對細(xì)胞骨架實驗進(jìn)行了探索優(yōu)化，譚娟、錢鑫萍、付秀芹、佟樹坤、馮振月等分別對細(xì)胞骨架觀察實驗的條件進(jìn)行了探索，對抽提試劑濃度、抽提時間、固定液、固定時間及染色時間等步驟做了優(yōu)化，但都沿用了經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)染色法，該方法多采用植物細(xì)胞作為實驗材料，經(jīng)Triton X-100處理細(xì)胞后保留細(xì)胞骨架蛋白，又經(jīng)M緩沖液穩(wěn)定肌動蛋白，再經(jīng)戊二醛固定，最后用考馬斯亮藍(lán)-R250染色，每個環(huán)節(jié)之后均用PBS漂洗，整個過程需持續(xù)3-4個小時，雖然實驗操作簡單，但耗時相對冗長。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種細(xì)胞骨架實驗樣品的快速制備方法，該方法能夠極大提高時間利用效率。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種細(xì)胞骨架實驗樣品的快速制備方法，其特征在于具體步驟為：

步驟S1，撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮置于正方體塑料盒中，加入0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液，待洋蔥鱗莖內(nèi)表皮下沉后，置于微波爐中于30-40℃加熱處理2min；

步驟S2，吸去磷酸緩沖液，加入抽提劑1wt% Triton X-100溶液覆蓋洋蔥樣品，置于微波爐中于30-40℃加熱處理5min；

步驟S3，吸去抽提劑，用M-緩沖液浸泡洗滌3次，每次均置于微波爐中于30-40℃加熱處理2min，其中M-緩沖液由50mmol/L咪唑、50mmol/L氯化鉀、0.5mmol/L氯化鎂、1mmol/LEGTA、0.1mmol/L乙二胺四乙酸和1mmol/L β-巰基乙醇組成；

步驟S4，吸去M-緩沖液，加入固定液3wt%戊二醛溶液覆蓋洋蔥樣品，置于微波爐中于30-40℃加熱處理5min；

步驟S5，吸去固定液，用磷酸鹽緩沖液浸泡洗滌3次，每次均置于微波爐中于30-40℃加熱處理2min；

步驟S6，吸去磷酸鹽緩沖液，加0.2wt%考馬斯亮藍(lán)R250染液置于微波爐中于30-40℃加熱處理3min；

步驟S7，用蒸餾水沖洗1-2次去除浮液，加蓋玻片觀察。

進(jìn)一步限定，步驟S2中所述抽提劑1wt% Triton X-100溶液由M-緩沖液配制。

進(jìn)一步限定，步驟S4中所述固定液3wt%戊二醛溶液由磷酸鹽緩沖液配制。

進(jìn)一步限定，步驟S6中所述0.2wt%考馬斯亮藍(lán)R250染液的溶劑由以下體積百分含量的溶液組成：甲醇46.5%、冰醋酸7%和蒸餾水46.5%。

進(jìn)一步限定，每個步驟中的樣品在微波爐中處理時需要置于盛滿水的燒杯中，每次處理結(jié)束后要及時更換燒杯中的水以避免燒杯中水的溫度超過40℃。