[發明專利]耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株、培養基、馴化篩選方法及應用

在審

• 申請號: 202211056826.0
• 申請日: 2022-08-31
• 公開（公告）號: CN116286442A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 程國平;李必金;龍泉偉;高銘澤;高鵬;李巖;趙津津
• 申請（專利權）人: 通遼梅花生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C12P13/18;C12R1/15
• 代理公司: 內蒙古欣洋瑞專利代理有限公司 15110
• 代理人: 劉彩霞

本發明公開了一種耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株、培養基、馴化篩選方法及應用，耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株為谷氨酸棒桿菌(Corynebactenumglutamicum)，命名為MHZ?0115，保藏編號為：CGMCC?No.25175；其可用于發酵生產谷氨酸。其馴化篩選方法包括如下步驟：(一)原始菌株活化及擴大培養得到種子液；(二)取步驟(一)得到的種子液分兩階段進行溫度馴化得到高溫馴化谷氨酸棒桿菌。本發明的菌株在45℃高溫下可以進行發酵，菌體能夠生長且產谷氨酸。可大量降低能耗，降低發酵成本，適合工業化生產，并且實現“增產、降耗、減排”的綜合目標。

技術領域：

本發明微生物發酵技術領域，特別是涉及一種耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株、培養基、馴化篩選方法及應用。

背景技術：

谷氨酸(glutamic?acid)是蛋白結構氨基酸之一，也是一種重要的游離氨基酸，廣泛應用于食品、醫藥、日化及飼料等工業領域。

谷氨酸生產方法目前主要采用發酵法生產，即利用微生物合成谷氨酸，該方法主要包括糖酵解途徑(EMP)、磷酸戊糖途徑(PPP)、三羧酸循環(TCA)、乙醛酸循環和CO₂固定反應等。發酵法生產谷氨酸所用到的菌株為谷氨酸棒桿菌。

谷氨酸棒桿菌最適宜生長的溫度為30-33℃，當發酵液的溫度超過33℃時，就必須使用冷卻水進行降溫，否則就會對谷氨酸棒桿菌的活性產生抑制，影響谷氨酸的產率。在谷氨酸發酵工廠生產中，夏季高溫天氣，發酵前期溫度很難控制在30-33℃之間。前期高溫會造成菌株活力早衰，后勁不足，后期產酸幅度低或者停滯，致使產量下降，成本升高。此外高溫條件下進行生產，需要大量的冷卻手段，能耗高。所以需要對現有谷氨酸棒桿菌進行高溫馴化篩選，使之耐高溫，在高溫環境下菌體也可以正常生長和產谷氨酸。

發明內容：

本發明的第一個目的在于提供一種耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株。

本發明的第二個目的在于提供：一種耐高溫谷氨酸棒桿菌菌的用途。

本發明的第三個目的在于提供：耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株的馴化篩選方法。

本發明的第四個目的在于提供：用于耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株的馴化篩選方法的馴化培養基。

本發明的第一個目的由如下技術方案實施：耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株，所述菌株為谷氨酸棒桿菌(Corynebactenumglutamicum)，命名為MHZ-0115，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，地址：中國，北京，保藏編號為：CGMCC?No.25175，保藏時間：2022年6月23日。

進一步，所述菌株在41℃-45℃下，用于發酵生產谷氨酸，產酸量高于43g/L。

進一步，所述菌株在33℃-41℃下，用于發酵生產谷氨酸，產酸量高于45g/L，發酵周期為20h-24h。

本發明的第二個目的由如下技術方案實施：所述的耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株，用于發酵生產谷氨酸。

本發明的第三個目的由如下技術方案實施：所述耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株的馴化篩選方法，其包括如下步驟：

(一)原始菌株接種于LB平板培養基進行活化，從新鮮活化的平板上挑取菌苔，接種于種子培養基中擴大培養得到種子液；

(二)取步驟(一)得到的種子液進行溫度馴化得到高溫馴化谷氨酸棒桿菌：溫度馴化分為兩個階段，第一階段溫度馴化的溫度區間為：35℃-41℃，初始馴化溫度為35℃，溫度逐步提高，每次提高2℃；第二階段溫度馴化的溫度區間為：42℃-45℃，初始馴化溫度為42℃，溫度逐步提高，每次提高1℃。

進一步，所述步驟(一)原始菌株活化及擴大培養得到種子液的具體方法包括如下步驟：