[發明專利]耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株、培養基、馴化篩選方法及應用

在審

• 申請號: 202211056826.0
• 申請日: 2022-08-31
• 公開（公告）號: CN116286442A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 程國平;李必金;龍泉偉;高銘澤;高鵬;李巖;趙津津
• 申請（專利權）人: 通遼梅花生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C12P13/18;C12R1/15
• 代理公司: 內蒙古欣洋瑞專利代理有限公司 15110
• 代理人: 劉彩霞

1.耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株，其特征在于，所述菌株為谷氨酸棒桿菌(Corynebactenumglutamicum)，命名為MHZ-0115，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，地址：中國，北京，保藏編號為：CGMCC?No.25175，保藏時間：2022年6月23日。

2.如權利要求1所述耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株，其特征在于，所述菌株在41℃-45℃下，用于發酵生產谷氨酸，產酸量高于43g/L。

3.如權利要求1所述耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株，其特征在于，所述菌株在33℃-41℃下，用于發酵生產谷氨酸，產酸量高于45g/L，發酵周期為20h-24h。

4.如權利要求1-3任一所述的耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株，用于發酵生產谷氨酸。

5.如權利要求1所述耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株的馴化篩選方法，其特征在于，其包括如下步驟：

(一)原始菌株接種于LB平板培養基進行活化，從新鮮活化的平板上挑取菌苔，接種于種子培養基中擴大培養得到種子液；

(二)取步驟(一)得到的種子液進行溫度馴化得到高溫馴化谷氨酸棒桿菌：溫度馴化分為兩個階段，第一階段溫度馴化的溫度區間為：35℃-41℃，初始馴化溫度為35℃，溫度逐步提高，每次提高2℃；第二階段溫度馴化的溫度區間為：42℃-45℃，初始馴化溫度為42℃，溫度逐步提高，每次提高1℃。

6.如權利要求5所述的耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株的馴化篩選方法，其特征在于，所述步驟(一)原始菌株活化及擴大培養得到種子液的具體方法包括如下步驟：

(1)在33℃溫度下，將原始菌株接種到LB平板培養基上，進行活化培養，培養時間為24h；

(2)從步驟(1)得到的活化后菌株中，挑選生長占優勢的單菌落，取一環接種到搖瓶種子培養基上，并放在往復式搖床培養，200rpm，33℃培養，培養24h得到種子液。

7.如權利要求5所述的耐高溫谷氨酸棒桿菌菌株的馴化篩選方法，其特征在于，所述步驟(二)中第一階段溫度馴化的具體操作方法為：

(1)將所述步驟(一)培養得到的種子液取一環稀釋后涂布于LB平板培養基上，放到生化培養箱中，35℃培養24h；然后，挑選生長占優勢的單菌落，取一環接種于搖瓶馴化培養基中，放到往復式搖床上，200rpm，35℃培養；

(2)待步驟(1)菌體生長至對數期后，取一環稀釋后涂布于LB平板培養基上，放到生化培養箱中，37℃培養24h；然后，挑選生長占優勢的單菌落，取一環接種于搖瓶馴化培養基中，放到往復式搖床上，200rpm，37℃培養；

(3)待步驟(2)菌體生長至對數期后，取一環稀釋后涂布于LB平板培養基上，放到生化培養箱中，39℃培養24h；然后挑選生長占優勢的單菌落，取一環接種于搖瓶馴化培養基中，放到往復式搖床上200rpm，39℃培養；

(4)待步驟(3)菌體生長至對數期后，取一環稀釋后涂布于LB平板培養基上，放到生化培養箱中，41℃培養72h；然后，挑選生長占優勢的單菌落，取一環接種于搖瓶馴化培養基中，放到往復式搖床上200rpm，41℃培養；種子生長到對數期后，完成第一階段溫度馴化。