[發明專利]一種抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑及其制備方法、應用

在審

• 申請號: 202211052362.6
• 申請日: 2022-08-30
• 公開（公告）號: CN115475241A
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發明（設計）人: 龍云;李貞賢;姜家錚;張儀;秦彰;祝海梅
• 申請（專利權）人: 湖南中醫藥大學第一附屬醫院（（中醫臨床研究所））
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K9/127;A61K47/28;A61K47/24;A61P9/10
• 代理公司: 長沙中科啟明知識產權代理事務所(普通合伙) 43226
• 代理人: 余歡

1.一種抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑，其特征在于：包括抗體、脂質膜材和仿生細胞膜。

2.根據權利要求1所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑，其特征在于：所述抗體為依洛尤單抗；所述脂質膜材包括大豆卵磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000-NH2；所述仿生細胞膜為巨噬細胞膜。

3.一種如權利要求2所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1、制備仿生細胞膜；

S2、采用逆向蒸發法制備抑制PCSK9的納米脂質體：定量稱取大豆卵磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000-NH2混合溶于氯仿、乙醚和超純水混合液中；將依洛尤單抗加到類脂溶液中，水浴超聲，形成W/O型乳液；將所得乳液置于旋轉蒸發儀中減壓蒸發除去有機溶劑，達膠態后，加入水合介質，繼續減壓蒸餾除去剩余的有機溶劑；旋轉水合至瓶壁凝膠脫落，過0.22μm微孔濾膜，得到抑制PCSK9的納米脂質體；采用透析法分離未包載的游離抗體；

S3、將抑制PCSK9的納米脂質體溶液與仿生細胞膜的PBS溶液混合后攪拌得到所述抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑。

4.根據權利要求3所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法、應用，其特征在于：S1中，所述仿生細胞膜的具體制備過程為：當細胞培養皿中的RAW264.7細胞長滿后，用細胞刮刀將細胞刮下后離心；收集的細胞在4℃下用PBS(pH7.4)洗滌2遍，然后懸浮在含有PMSF(1mM)的膜蛋白提取劑A中；混合物在冰浴中裂解30-60min，4℃水浴超聲10-15min；37℃和-80℃反復凍融4次，每次20-30min；然后離心取上清液，繼續離心得到巨噬細胞膜。

5.根據權利要求3所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法、應用，其特征在于：所述卵磷脂與所述抗體的質量比為1-5:1；所述卵磷脂與所述DSPE-PEG2000-NH2的質量比為10-20:6。

6.根據權利要求3所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法、應用，其特征在于：所述水合介質為含2％吐溫-80的磷酸緩沖液。

7.根據權利要求3所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法、應用，其特征在于：所述透析是使用截留分子量為200-300kDa的透析袋透析24-72h。

8.根據權利要求3所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法、應用，其特征在于：所述卵磷脂和巨噬細胞膜的質量比為10:1；所述攪拌轉速為800-1000rpm，時間為1-2小時。

9.根據權利要求3所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的制備方法、應用，其特征在于：S2中，所述的抑制PCSK9的納米脂質體的平均粒徑為160-180nm；抑制PCSK9的納米脂質體對抗體活性成分的包封率為：90％。

10.一種如權利要求1-9任意一所述的抑制PCSK9的仿生納米脂質體制劑的應用，其特征在于：用于制備預防和/或治療動脈粥樣硬化的藥物。