[發(fā)明專利]一種檢測人類β-地中海貧血基因分型的核酸組合及試劑盒與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211049795.6
• 申請日: 2022-08-30
• 公開（公告）號: CN116064769A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董瑞華;馬霜;趙艷蘋;汪再興
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢友芝友醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 任燕妮

本發(fā)明公開了一種檢測人類β?地中海貧血基因分型的核酸組合及試劑盒與應(yīng)用，該核酸組合包括用于檢測β?globin基因?32、?30、?29、?28、CD+40/43、Int、CD14/15、CD17、CD26、CD27/28、IVS1?1、IVS1?5、CD31、CD41/42、CD43、CD71/72和IVS?II?654位點的探針和引物；上述引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1?17所示，探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.18?46所示。利用上述核酸組合制備的試劑盒在檢測人類β?地中海貧血基因突變時具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、省時、結(jié)果判讀準(zhǔn)確等優(yōu)勢。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷基因檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種檢測人類β-地中海貧血基因分型的核酸組合及試劑盒與應(yīng)用。

背景技術(shù)

β地中海貧血是一種高發(fā)于中國南方十省等地區(qū)的常染色體隱性遺傳病，由于β-珠蛋白基因突變導(dǎo)致肽鏈表達(dá)失衡而產(chǎn)生的溶血性貧血。β-珠蛋白基因突變以點突變?yōu)橹?，少?shù)為缺失型。中國目前至少已報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52AT，HBB：c.-78AG，HBB：c.79GA，HBB：c.316-197CT和HBB：c.216_217insA占了全部突變類型的90％以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：(1)靜止型β-地貧，基因型為β⁺⁺/β^N，血液學(xué)表型正常或臨界，一般只能通過分子診斷識別；(2)輕型β-地貧，基因型為β⁰/β^N或β⁺/β^N，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbA2值升高；(3)中間型β-地貧，基因型為β⁺/β⁺或β⁺/β⁰，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；(4)重型β-地貧，基因型為β⁺/β⁰或β⁰/β⁰，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活。患兒出生時無癥狀，常于嬰兒期(3-12月齡)發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子(β^D/β^N)，合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子(β⁰/β⁰)，或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子(β⁰/β^N或β⁺/β^N)，也會顯示中間型的表型。

β地中海貧血目前尚無法治愈，輸血和骨髓移植可改善患者生活質(zhì)量，但給患者和家庭帶來了沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)和心理壓力。應(yīng)用相應(yīng)分析技術(shù)通過人群篩查及產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是國內(nèi)外公認(rèn)的首選預(yù)防措施。所以，簡單實用、準(zhǔn)確靈敏的珠蛋白基因突變檢測方法，是實現(xiàn)此病有效防控的前提與基礎(chǔ)。

在目前的臨床應(yīng)用之中，常規(guī)使用的PCR-反向點雜交技術(shù)(也稱PCR-RDB)采用定性PCR擴增結(jié)合反向點雜交法檢測β地貧點突變。PCR-RDB技術(shù)的優(yōu)點是在一張雜交膜上可同時篩查多種點突變，區(qū)別于傳統(tǒng)雜交法一次只能檢測一種突變，目前國內(nèi)外的β-地中海基因突變的篩查試劑也大多使用該方法；缺點是過程復(fù)雜、耗時長、容易污染出現(xiàn)假陽性，并且靈敏度較低，容易出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象。

實時熒光PCR技術(shù)是近幾年發(fā)展并大規(guī)模應(yīng)用于臨床的一種新技術(shù)，該技術(shù)在通過設(shè)計特異性的引物和探針組合、構(gòu)建特異性的PCR反應(yīng)來實現(xiàn)對靶標(biāo)的定性或定量PCR檢測。該技術(shù)避免了電泳的有毒、高污染風(fēng)險操作，同時操作時間短、靈敏度高，但單管只能檢測1個位點，無法單管檢測多個位點，通量偏低。