[發明專利]一種新型多巖藻糖支鏈FCS、制備方法及其緩解高糖損傷的應用

在審

• 申請號: 202211048589.3
• 申請日: 2022-08-30
• 公開（公告）號: CN115433749A
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 李惠靜;公丕賢;吳彥超
• 申請（專利權）人: 威海海洋生物醫藥產業技術研究院有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;A23L33/125;A61K31/715;A61P3/10
• 代理公司: 威海科星專利事務所 37202
• 代理人: 王玲燕

1.一種新型多巖藻糖支鏈FCS，其特征在于多巖藻糖支鏈FCS的結構如下：

一種新型多巖藻糖支鏈FCS的制備方法，其特征在于制備方法的步驟如下：

（1）淡干海參粉碎，加入膠原酶和基質金屬蛋白酶酶解；加入商品化廣譜蛋白酶繼續酶解，煮沸滅酶后，離心收集上清，醇沉后收集沉淀，重溶，透析得粗多糖溶液；

（2）粗多糖溶液通過截留分子量80-150 kDa膜一步分離，濾出液凍干即為純FCS；

根據權利要求2所述的一種新型多巖藻糖支鏈FCS的制備方法，其特征在于所述的步驟（1）中所述膠原蛋白酶和基質金屬蛋白酶的總添加量為2000 U/g海參粉，酶解溫度為 25~35 ℃，酶解時間為1-2 h；廣譜蛋白酶選用菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任意一種或兩種以上結合，酶解溫度為25~35 ℃，酶解時間為3-5 h。

2.根據權利要求2所述的一種新型多巖藻糖支鏈FCS的制備方法，其特征在于所述的步驟（2）得到的純FCS進行核磁測定，三級質譜法測定主鏈二糖結構。

3.根據權利要求4所述的一種新型多巖藻糖支鏈FCS的制備方法，其特征在于所述的三級質譜的樣品前處理采用稀硫酸去除巖藻糖支鏈，硫酸軟骨素酶ABC酶解得主鏈二糖；質譜參數為選用Obitrap系列質譜儀的數據依賴性負離子掃描模式，每一級掃描設置上一級掃描的響應值前三的離子片段觸發離子打碎。

4.掃描范圍100~500 Da，分辨率70000，錐孔電壓100 V，碰撞能35 eV。

5.根據權利要求2所述的一種新型多巖藻糖支鏈FCS的制備方法，其特征在于所述的步驟（2）得到的純FCS建立斑馬魚高糖損傷模型，測定FCS的治療作用。

6.根據權利要求6所述的一種新型多巖藻糖支鏈FCS的制備方法，其特征在于所述的斑馬魚高糖損傷模型是選用斑馬魚胚胎，用葡萄糖浸泡法建立高糖損傷模型，葡萄糖濃度為100~200 mM，浸泡時間為2~3 d。

7.一種新型多巖藻糖支鏈FCS緩解高糖損傷的應用，其特征在于將多巖藻糖支鏈FCS用于緩解高糖損傷的機體中。