[發明專利]一管式RT-qPCR全預混反應試劑、應用及RT-qPCR方法在審
| 申請號： | 202211045852.3 | 申請日： | 2022-08-30 |
| 公開（公告）號： | CN116004776A | 公開（公告）日： | 2023-04-25 |
| 發明（設計）人： | 顧東東;趙百慧;馬彬恒;侯巧利 | 申請（專利權）人： | 上海伯杰醫療科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C07K16/40;C12Q1/70;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 張金銘 |
| 地址： | 201415 上海市奉賢區滬杭公路1588號3號樓13*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一管式 rt qpcr 全預混 反應 試劑 應用 方法 | ||
1.一管式RT-qPCR全預混反應試劑，其特征在于，所述試劑包括帶有雙封閉能力Taq酶單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑，其特征在于，所述帶有雙封閉能力Taq酶單克隆抗體的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示。
3.根據權利要求2所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑，其特征在于，所述帶有雙封閉能力Taq酶單克隆抗體與Taq?DNA聚合酶的含量比(U/U)為1:3～9，優選為1:5。
4.根據權利要求1所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑，其特征在于，還包括核酸適配體。
5.根據權利要求4所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑，其特征在于，所述核酸適配體含有的堿基數量為50～100bp；
優選地，所述核酸適配體的濃度為0.2～0.7ng/mL，優選為0.5ng/mL。
6.根據權利要求1～5任一項所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑，其特征在于，還包括穩定劑和/或增強劑；
優選地，所述穩定劑包括0.5～1mg/mL?BSA、0.005％～0.008％(v/v)明膠、5％～10％(v/v)甘油或0.1％～0.2％(v/v)非離子型去垢劑中至少兩種；
優選地，所述穩定劑包括0.7mg/mL?BSA、0.006％(v/v)明膠和7％(v/v)甘油；
優選地，所述增強劑包括1％～2％(v/v)甲酰胺、1％～5％(v/v)DMSO、0.1～0.3M甜菜堿、0.5～1.0g/L?SSB單鏈結合蛋白、0.3～0.8g/L焦磷酸酶、0.1～0.3M海藻糖和0.05～0.1g/L疊氮鈉；
優選地，所述增強劑包括2％甲酰胺、2.5％DMSO、0.2M甜菜堿、0.8g/L?SSB單鏈結合蛋白、0.2M海藻糖和0.08g/L疊氮鈉。
7.權利要求1～6任一項所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑在制備一管式RT-qPCR全預混反應體系中的應用。
8.一管式RT-qPCR全預混反應體系，其特征在于，包括權利要求1～6任一項所述的一管式RT-qPCR全預混反應試劑；
還包括DNA聚合酶、逆轉錄酶、UNG酶、RNA酶抑制劑、緩沖液、穩定劑、增強劑、上下游引物和熒光標記的探針組合物；
優選地，所述DNA聚合酶為熱啟動Taq?DNA聚合酶，延伸速度為1.5sec/kb，優選添加量為3～6U；
優選地，所述逆轉錄酶包括M-MLV逆轉錄酶，耐受溫度為60℃以上，添加量為5～10U；
優選地，所述UNG酶為0.1～0.5U的熱敏UNG酶；
優選地，所述RNA酶抑制劑添加量為2～3U；
優選地，所述緩沖液為100～500mM的Tris-Hcl緩沖溶液；
優選地，所述緩沖液含有無機鹽，所述無機鹽為硫酸鹽和/或氯化鹽，更優選為氯化鹽。
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