[發明專利]一種子宮內膜癌基因甲基化水平檢測試劑及其應用

有效

• 申請號: 202211042436.8
• 申請日: 2022-08-29
• 公開（公告）號: CN116064797B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 徐斌杰;李嘉穎;李秋苑
• 申請（專利權）人: 廣州達健生物科技有限公司;安徽達健醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 趙琴娜

本發明公開了一種子宮內膜癌基因甲基化水平檢測試劑及其應用，所述檢測試劑包括能夠特異性檢測生物樣本中SEQ?ID?NO:37和/或SEQ?ID?NO:38所示的核苷酸序列的全長或其任意部分區域核苷酸序列中CpG二核苷酸位點甲基化水平的檢測試劑。本發明提供的子宮內膜癌基因甲基化檢測試劑以DNA甲基化異常作為檢測對象，基于數字PCR技術，可在微反應單元內高效靈敏地完成目標核酸片段的PCR擴增，獲取熒光信號進行統計學分析，徹底擺脫對標準曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數，提高實驗結果在批內和批間的穩定性，實現對起始樣品的絕對定量，同時提高核酸檢測方法的靈敏度，有效減少假陰性的出現，適用于臨床檢測。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種子宮內膜癌基因甲基化水平檢測試劑及其應用。

背景技術

子宮內膜癌是發生于子宮內膜的上皮性惡性腫瘤，屬于女性生殖道三大常見惡性腫瘤之一。子宮內膜癌多見于圍絕經期及絕經后婦女，平均年齡55歲左右，發病高峰年齡為55～60歲，但近年來其發病率呈現持續上升和年輕化趨勢。子宮內膜癌治療效果與臨床分期密切相關，早期子宮內膜癌病患通常有較好的預后，據統計I期、II期病患的五年生存率可達70％以上，III期病患的五年生存率約為40-50％，而IV期病患的五年生存率僅為15-20％。為了提高子宮內膜癌患者的生存質量及改善患者的預后，盡早發現并進行干預治療顯得尤其重要。因子宮內膜癌的致病因素復雜且發病機制尚不明確，想要對其實現早診早治絕非易事，臨床上不少子宮內膜癌患者被發現時已是中晚期，錯失了最佳治療時機。

在子宮內膜癌早期，多數患者沒有明顯的相關陽性體征，而目前為止尚沒有推薦的子宮內膜癌常規篩查方法，當患者表現出臨床癥狀如陰道出血、陰道排液和下腹疼痛時，去醫院在婦科醫生指導下進行臨床診斷時，可能已是中晚期。目前，針對子宮內膜癌的主要診斷手段主要有：1)影像學檢查：最常用的無創檢查方法為陰道超聲檢查，主要用于初步判斷，腹盆腔磁共振(MRI)檢查可用于鑒別黏膜下子宮肌瘤、子宮內膜息肉、子宮肉瘤、宮頸癌等，然而此類方法對子宮內膜癌早癌不夠靈敏，無法進行明確診斷；2)子宮內膜活檢：子宮內膜癌的診斷標準，通過刮取子宮內膜組織，將刮出物送檢，進行可視化觀察，發現早期腫瘤，明確病變的性質、部位、累及程度，該方法是一種有創操作，易造成身體不適；3)實驗室診斷方法：目前最常用的臨床檢測標記物是糖鏈抗原CA125、人附睪蛋白4(HE4)，該方法靈敏度特異性均較低，無法有效地篩檢病人。因此有必要研發一種無創的準確可靠的新型子宮內膜癌標識物和檢測方法。

表觀遺傳學是近年來腫瘤研究的熱點領域，DNA的甲基化、組蛋白修飾、染色質重塑以及非編碼RNA調控等表觀遺傳學改變都被認為與腫瘤的發生有著密切關系，其中DNA的甲基化是最為常見的表觀遺傳學改變，其可調控細胞增殖、凋亡與分化，且水平與腫瘤的生物學特性密切相關。目前研究表明子宮內膜癌與其他多種癌癥一樣，是由多種致癌因素長期作用的結果，其病變過程是一個多基因變異累積的復雜過程，涉及多種癌基因和抑癌基因的異常甲基化，其中大多數異常甲基化為抑癌基因的高甲基化，高甲基化往往導致抑癌基因的轉錄沉默。DNA甲基化異常通常發生在癌癥早期，并貫穿癌癥的發生和發展過程，其甲基化狀態一旦形成需要受到外界環境較長時間的持續刺激才會發生改變。因此DNA甲基化指標的檢測可以作為癌癥診斷、早期篩查以及預后的重要生物指標，有必要開發一種基于DNA甲基化指標的子宮內膜癌檢測方法。研究表明子宮內膜癌是由多種致癌因素長期作用的結果，其病變過程是一個多基因變異累積的復雜過程，涉及多種癌基因和抑癌基因的異常甲基化，其中大多數異常甲基化為抑癌基因的高甲基化，高甲基化往往導致抑癌基因的轉錄沉默。DNA甲基化異常通常貫穿癌癥的發生和發展的整個過程，其甲基化狀態一旦形成需要受到外界環境較長時間的持續刺激才會發生改變。因此DNA甲基化指標的檢測可以作為癌癥診斷、早期篩查以及預后的重要生物指標，有必要開發一種基于DNA甲基化指標的子宮內膜癌篩查方法。