[發明專利]一種SH3TC2基因致病突變體及其在制備腓骨肌萎縮癥4C型診斷試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202211039435.8
• 申請日: 2022-08-29
• 公開（公告）號: CN115927354A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 曾橋;鄧亞蘭;吳偉娟;王維
• 申請（專利權）人: 湖南家輝生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

1.一種SH3TC2致病突變基因，其特征在于，所述SH3TC2致病突變基因包括c.590_591insAATG；

所述c.590_591insAATG在登錄號為NM_024577.4的6號外顯子的第590位和591位間存在AATG插入突變。

2.一種SH3TC2基因致病突變體，其特征在于，所述SH3TC2基因致病突變體為復合雜合突變，包括c.590_591insAATG和c.3733_3734delGG；

所述c.590_591insAATG在登錄號為NM_024577.4的6號外顯子的第590位和591位間存在AATG插入突變；

所述c.3733_3734delGG在登錄號為NM_024577.4的17號外顯子的第3733位和3734位存在GG缺失突變。

3.擴增權利要求2所述SH3TC2基因致病突變體的引物組，其特征在于，所述引物組包括：引物對1和引物對2；

所述引物對1包括SH3TC2-1F和SH3TC2-1R；

所述引物對2包括SH3TC2-2F和SH3TC2-2R；

所述SH3TC2-1F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

所述SH3TC2-1R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

所述SH3TC2-2F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

所述SH3TC2-2R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

4.利用權利要求1所述SH3TC2致病突變基因或利用權利要求2所述的SH3TC2基因致病突變體或權利要求3所述的引物組在制備腓骨肌萎縮癥4C型診斷試劑或試劑盒中的應用。

5.一種腓骨肌萎縮癥4C型的診斷試劑盒，其特征在于，所述診斷試劑盒包括權利要求3所述的引物組。

6.根據權利要求5所述的診斷試劑盒，其特征在于，所述診斷試劑盒還包括測序引物；所述測序引物包括：引物對3和引物對4；

所述引物對3包括SH3TC2-Seq1F和SH3TC2-Seq1R；

所述引物對4包括SH3TC2-Seq2F和SH3TC2-Seq2R；

所述SH3TC2-Seq1F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示；

所述SH3TC2-Seq1R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示；

所述SH3TC2-Seq2F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示；

所述SH3TC2-Seq2R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示。

7.根據權利要求5或6所述的診斷試劑盒，其特征在于，所述診斷試劑盒還包括c.3733_3734delGG位點陽性突變參考品DNA1和c.590_591insAATG位點陽性突變參考品DNA2；

所述DNA1的單鏈核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示；

所述DNA2的單鏈核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示。

8.一種鑒定權利要求2所述SH3TC2基因致病突變體的基因型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

以待測樣品DNA為模板，利用權利要求3所述引物組進行PCR擴增，得到擴增產物；

將擴增產物進行測序，確定SH3TC2基因致病突變體的基因型。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系以20μL計，包括10×PCR緩沖液2μL、dNTPs0.4μL、SH3TC2-1F或SH3TC2-2F0.5μL、SH3TC2-1R或SH3TC2-2R0.5μL、模板1μL、Taq酶0.2μL和余量的ddH₂O。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應進程包括：95℃預變性5min；95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸60s，30個循環；72℃反應7min。