[發明專利]一種環縮肽類化合物及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202211037105.5
• 申請日: 2022-08-26
• 公開（公告）號: CN115505033A
• 公開（公告）日: 2022-12-23
• 發明（設計）人: 章華偉;劉圓圓;邵益蘭;蔡悅;王鴻
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C07K11/02
• 分類號: C07K11/02;C12P21/04;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/14;A61K38/15;A61P35/00;C12R1/77
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 李世玉

本發明公開了一種環縮肽類化合物及其制備方法與應用，本發明首次從尖胞鐮刀菌發酵產物中分離出來一種高產量的環縮肽類化合物(I)，產率為10mg/L。本發明環縮肽類化合物采用微生物液態發酵生產，操作工藝簡單，成本低，對環境無污染。本發明環縮肽類化合物(I)具有抗腫瘤活性，后期可以進行結構修飾，制備其衍生物來大幅度提高其活性，從而制備抗腫瘤藥物。

技術領域

本發明涉及一種抗耐藥腫瘤先導物，特別涉及一種環縮肽類化合物及其制備方法與應用。

背景技術

惡性腫瘤嚴重威脅著人類健康，已成為人類死亡的第二位致命性疾病，抗腫瘤藥物的研究仍然是醫學發展的一個主要領域。海洋環境中有數千種生物物種，它們是新型功能蛋白和多肽的一個有價值的來源，已被應用于許多疾病的治療，包括癌癥。

植物內生真菌被認為是天然產物最豐富的來源之一，它們在新藥的開發中起著潛在的重要作用，濱海植物因其生存環境特殊，其內生真菌可能存在與陸地以及海洋植物來源的內生真菌不同的代謝機制。鐮刀菌作為三大絲狀真菌之一，該菌中普遍存在有聚酮合成酶、非核糖體肽合成酶和萜烯合成酶，能產生結構新穎多樣的次級代謝產物(生物堿、肽、酰胺、萜類、醌和吡喃酮等)，而這些次生代謝物都普遍具有潛在藥理活性，比如抗菌、抗腫瘤、抗虐、抗氧化以及酶抑制等。

發明內容

本發明目的是提供一種環縮肽類化合物及其制備方法與應用，所述環縮肽類化合物采用生物方法合成，對環境無污染，解決了所述化合物大規模生產的問題，且此化合物具有一定的抗腫瘤活性，對活性藥物先導化合物的發現起到促進作用。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一種式(I)所示環縮肽類化合物，具有如下化學結構：

本發明提供一種式(I)所示環縮肽類化合物的制備方法，所述方法按如下步驟進行：

(1)菌株發酵：將尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)CGMCC No.17763接至GPY 培養基，在室溫(28℃)下避光靜置發酵10-30天(優選20天)，獲得發酵混合物；所述GPY培養基組成：葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，酵母提取物2g/L，L-色氨酸2 g/L，海鹽2g/L，溶劑為水，pH7.5；

(2)化合物提?。簩⒉襟E(1)制備的發酵混合物離心(優選20℃、4000rpm離心20min)，取沉淀加入甲醇a后進行超聲輔助萃取，有機層減壓濃縮至無液體流出，得到粗提物浸膏；將全部粗提物浸膏用甲醇b溶解后用0.22μm有機濾頭進行過濾，濾液選用高效液相色譜分析型色譜柱進行等度洗脫，流動相為體積比70:30的乙腈與水，收集第16min的流出液，去溶劑，干燥(優選25℃干燥)，獲得所述式(I)所示環縮肽類化合物。

優選的，步驟(1)所述尖孢鐮刀菌CGMCC No.17763發酵前先活化，種子擴大培養，再將種子液以50mL/L的接種量接種至GPY培養基；所述活化和種子擴大培養按如下步驟進行：①活化培養：將尖孢鐮刀菌CGMCC No.17763接入PDA斜面培養基，28℃培養箱培養3-4天，活化菌種；PDA斜面培養基終濃度組成為：葡萄糖 20g/L，馬鈴薯200g/L，瓊脂15-18g/L，溶劑為蒸餾水，pH自然；②種子培養：從步驟①活化菌落中挑取一接種環菌體接種至PDB種子培養基，在200rpm、28℃條件下搖床培養3天，獲得種子液；PDB種子培養基終濃度組成為：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，溶劑為蒸餾水，pH自然。

優選的，步驟(2)甲醇a加入量以發酵液總體積計為100mL/L；所述甲醇b加入量以粗提物浸膏的重量計為10mL/mg；所述甲醇a和甲醇b均為甲醇，為了區分不同步驟用量不同而命名，字母本身沒有含義；優選超聲提取3次，所述每次超聲條件為：30-50kHz超聲15-20min(優選40kHz、20min)。