[發明專利]一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法及應用

在審

• 申請號: 202211026870.7
• 申請日: 2022-08-25
• 公開（公告）號: CN115323032A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 安太成;王再霞;王保強;李桂英;蔡儀威;廖文
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12Q1/06;C12N15/03;C12R1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 魏香琴

本發明涉及一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法及應用。所述方法：將供體菌與受體菌分別活化后制備菌懸液，然后與耐藥靶點的抑制劑混合，培養得到接合轉移菌液；然后將接合轉移菌液涂布于雙抗性平板上，通過接合子濃度和受體菌濃度計算接合轉移頻率；所述供體菌含有耐抗生素的耐藥基因，所述受體菌不含該耐抗生素的耐藥基因，含有另一種耐抗生素的耐藥基因；本發明通過耐藥靶點的抑制劑抑制耐藥基因的接合轉移，并通過特定范圍的供體菌濃度，供受體菌混合比例，耐藥靶點的抑制劑的濃度、種類、作用時間等因素實現不同情況下耐藥基因的接合轉移頻率的調控；可以調控耐藥基因的傳播，控制耐藥性的發展。

技術領域

本發明屬于致病微生物防控領域，具體涉及一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法及應用。

背景技術

抗生素的耐藥性傳播會導致多重耐藥細菌的產生，抗生素的耐藥基因的轉移會導致多重耐藥細菌的產生。基因水平轉移的方式主要包括以下幾種：接合、轉化、轉導、溶源性轉換和轉座等，最主要的方式是接合轉移，高效地控制耐藥基因的接合轉移傳播已成為了亟需解決的問題。

β-內酰胺類，多粘菌素類、氨基糖甙類抗生素作為歷史最悠久、使用范圍最廣、臨床最常使用的抗生素，其耐藥基因傳播的問題也隨之而來日趨嚴重。β-內酰胺酶、多粘菌素類耐藥蛋白、氨基糖甙修飾酶分是細菌對β-內酰胺類多粘菌素類、氨基糖甙類抗菌藥物產生耐藥的主要原因。這些使菌體產生耐藥性的組分即為致病菌上的耐藥靶點。由于致病菌耐藥性問題日益嚴重耐藥靶點抑制劑越來越多地用于臨床。這些抑制劑調控基因接合轉移越來越重要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有耐藥基因的接合轉移控制的不足，提供一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法及應用。

本發明的目的在于提供一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法。

本發明的目的還在于提供所述方法在調控耐藥基因接合轉移中的應用。

本發明提供了一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法，該方法是將耐抗生素的供體受體菌種分別進行接種培養，經洗滌、重懸，得到不同濃度的供受體菌菌懸液，隨即加入不同濃度、不同種類的耐藥靶點的抑制劑進行處理，然后將供體菌與受體菌的菌懸液進行混合。在37℃的恒溫搖床中震蕩培養0.5～20h得到接合轉移液。接合轉移液涂布于雙抗平板后置于37℃恒溫培養箱培養24～36h。本發明研究發現，不同類型的靶點的抑制劑都可以對耐藥基因的接合轉移起到調控作用，但是調控效果有差異；不同濃度的靶點的抑制劑對耐藥基因的接合轉移的調控效果有一定的差異；不同供體菌濃度、不同供受體菌比例對耐藥基因的接合轉移的調控效果也均有一定差異，可以通過調控供體菌的濃度，供受體菌的混合比例，靶點的抑制劑的濃度、種類、作用時間等調控耐藥基因的接合轉移頻率；本發明的方法適用不同耐藥基因(抗生素耐藥基因)的接合轉移研究，可以實現對耐藥基因的接合轉移頻率進行調控，從而達到有效控制耐藥基因傳播的目的。本發明的方法具有可操作性大，實用性強的優勢，可以為控制環境水體中不同抗生素作用靶點的抗生素耐藥菌的傳播提供方法。

本發明的上述目的通過以下技術手段實現：

一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法，包括以下步驟：

S1.將供體菌與受體菌分別活化后制備供體菌菌懸液、受體菌菌懸液；所述供體菌含有耐抗生素的耐藥基因，所述受體菌不含該耐抗生素的耐藥基因，含有另一種耐抗生素的耐藥基因；所述供體菌為抗生素作用靶點為細胞壁、細胞膜或蛋白質合成的耐藥菌；

S2.將步驟S1制備的供體菌菌懸液、受體菌菌懸液分別與耐藥靶點的抑制劑混合，然后將兩混合菌懸液混合，混合液于36～38℃恒溫培養，得到接合轉移菌液；所述耐藥靶點的抑制劑為作用于細胞壁耐藥靶點的抑制劑、作用于細胞膜耐藥靶點的抑制劑或作用于蛋白質合成耐藥靶點的抑制劑；所述耐藥靶點的抑制劑為通過抑制抗生素耐藥菌耐藥靶點的表達來恢復細菌對抗生素敏感性的藥物；