[發明專利]一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法及應用

在審

• 申請號: 202211026870.7
• 申請日: 2022-08-25
• 公開（公告）號: CN115323032A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 安太成;王再霞;王保強;李桂英;蔡儀威;廖文
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12Q1/06;C12N15/03;C12R1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 魏香琴

1.一種利用耐藥靶點的抑制劑調控耐藥基因接合轉移的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將供體菌與受體菌分別活化后制備供體菌菌懸液、受體菌菌懸液；所述供體菌含有耐抗生素的耐藥基因，所述受體菌不含該耐抗生素的耐藥基因，含有另一種耐抗生素的耐藥基因；所述供體菌為抗生素作用靶點為細胞壁、細胞膜或蛋白質合成的耐藥菌；

S2.將步驟S1制備的供體菌菌懸液、受體菌菌懸液分別與耐藥靶點的抑制劑混合，然后將兩混合菌懸液混合，混合液于36～38℃恒溫培養，得到接合轉移菌液；所述耐藥靶點的抑制劑為作用于細胞壁耐藥靶點的抑制劑、作用于細胞膜耐藥靶點的抑制劑或作用于蛋白質合成耐藥靶點的抑制劑；所述耐藥靶點的抑制劑為通過抑制抗生素耐藥菌耐藥靶點的表達來恢復細菌對抗生素敏感性的藥物；

S3.將步驟S2制備的接合轉移菌液稀釋涂布于含有步驟S1所述供體菌所耐抗生素和受體菌所耐另一種抗生素的抗性平板上，步驟S1制備的總受體菌菌懸液稀釋涂布于含有步驟S1所述受體菌所耐另一種抗生素的抗性平板上，確定接合轉移菌液中接合子的濃度以及總受體菌的濃度，接合轉移頻率根據接合子濃度與總受體菌濃度的比例計算；通過調控供體菌濃度，供受體菌混合比例，耐藥靶點的抑制劑的濃度、種類或作用時間，實現調控耐藥基因的接合轉移頻率。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟S1中，所述供體菌為耐頭孢類抗生素的耐藥菌、耐多粘菌素類抗生素的耐藥菌或耐氨基糖甙類抗生素的耐藥菌；所述受體菌為耐鏈霉素的耐藥菌。

3.根據權利要求2所述方法，其特征在于，所述耐藥菌為大腸埃希氏桿菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、鏈球菌中的任一種。

4.根據權利要求3所述方法，其特征在于，所述耐藥菌為大腸埃希氏桿菌。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1中，所述供菌菌懸液和受體菌菌懸液的濃度均為10⁵～10¹⁰CFU/mL。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中，供體菌菌懸液與受體菌菌懸液以體積比為(0.25～4)：1混合。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中，所述混合液中作用于細胞壁耐藥靶點的抑制劑的濃度為1～200mg/L，作用于細胞膜耐藥靶點的抑制劑的濃度為2～1024mg/L，作用于蛋白質合成耐藥靶點的抑制劑的濃度為512～1024mg/L。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中所述培養的時間為1～20h。

9.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述作用于細胞壁耐藥靶點的抑制劑為他唑巴坦酸、克拉維酸或舒巴坦中任一種；所述作用于細胞膜耐藥靶點的抑制劑為紫檀茋、乙醇胺或白藜蘆醇中任一種；所述作用于蛋白質合成耐藥靶點的抑制劑為姜黃素、冬凌草甲素、山竹醇或漆樹酸中任一種。

10.權利要求1～9任一所述方法在調控耐藥基因接合轉移中的應用。