[發明專利]一種抗人配對盒基因2兔單克隆抗體、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202211004905.7
• 申請日: 2022-08-22
• 公開（公告）號: CN115724966A
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發明（設計）人: 劉勝南
• 申請（專利權）人: 北京中杉金橋生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 天津朗熠知識產權代理事務所(普通合伙) 12259
• 代理人: 劉歡

1.一種抗人配對盒基因2兔單克隆抗體，其特征在于：包括輕鏈可變區和/或重鏈可變區，

所述輕鏈可變區包括LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，

所述重鏈可變區包括HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。

2.根據權利要求1所述的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體，其特征在于：所述輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根據權利要求1所述的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體，其特征在于：所述重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.如權利要求1-3任一所述的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：構建重組表達載體；

S2：重組表達載體轉化E.coli，裂解離心獲得上清，純化得到重組蛋白；

S3：將重組蛋白免疫新西蘭大白兔，采外周血分離富集PBMCs，經磁珠篩選及ELISA篩選，選擇僅特異性識別PAX2蛋白的陽性克隆，經分子克隆、重組載體轉染至哺乳動物細胞中，將上清經親和層析純化得到所需抗體。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟S1的具體操作方法如下：以PAX2的第266至417位氨基酸作為免疫原，PAX5的第239至391位氨基酸及PAX8的第238至450位氨基酸作為檢測蛋白，基因合成對應的核苷酸序列，設計引物，基因兩側分別引入限制性內切酶位點SgfI和MluI，插入表達載體pET23a-N-His，分別構建重組表達質粒pET23a-His-rPAX2、pET23a-His-rPAX5、pET23a-His-rPAX8。

6.一種免疫檢測工具，其特征在于：包括如權利要求1-3任一所述的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體或如權利要求4-5任一所述的制備方法制得的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體。

7.根據權利要求6所述的免疫檢測工具，其特征在于：所述免疫檢測工具為試劑盒、芯片或試紙。

8.一種用于標記組織細胞或腫瘤細胞的試劑盒，其特征在于：包括如權利要求1-3任一所述的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體或如權利要求4-5任一所述的制備方法制得的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述組織包括：扁桃體、甲狀腺、輸卵管及腎臟，所述腫瘤包括腎透明細胞癌、子宮內膜癌及乳腺癌。