[發(fā)明專利]一種抗人配對盒基因2兔單克隆抗體、制備方法及其應用

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• 申請日: 2022-08-22
• 公開（公告）號: CN115724966A
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發(fā)明（設計）人: 劉勝南
• 申請（專利權）人: 北京中杉金橋生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 天津朗熠知識產權代理事務所(普通合伙) 12259
• 代理人: 劉歡

本發(fā)明提供了一種抗人配對盒基因2兔單克隆抗體、制備方法及其應用，所述單克隆抗體包括輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包括LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQID NO.6所示，所述重鏈可變區(qū)包括HCDR1、HCDR2及HCDR3，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。本發(fā)明所述的抗人配對盒基因2兔單克隆抗體可與PAX2蛋白特異性結合,與PAX5、PAX8沒有交叉反應，顯著提高了PAX2蛋白免疫檢測的特異性、準確性和可靠性，廣泛適用于多種腫瘤中PAX2蛋白的標記。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，尤其是涉及一種抗人配對盒基因2兔單克隆抗體、制備方法及其應用。

背景技術

PAX基因是一類控制器官發(fā)育的基因家族，進化上高度保守，由于它們都含有一個配對盒(paired box)而被命名為PAX基因。它們編碼的轉錄因子對哺乳類動物發(fā)育過程中的細胞增殖、分化與器官組織形成起重要的調控作用。目前發(fā)現該家族中共有九個成員，分別定位于不同的染色體。根據PAX蛋白家族是否存在八肽域和同源結構域將該基因家族劃分為四個亞組:GroupⅠ包括PAX1和PAX9；GroupⅡ包括PAX2、PAX5和PAX8；GroupⅢ包括PAX3和PAX7；GroupⅥ包括PAX4和PAX6。在器官發(fā)育過程中，該基因家族主要與骨骼、甲狀腺、牙齒、腎臟、中樞神經系統(tǒng)CNS、B細胞發(fā)育、胰腺、神經嵴等密切相關，其中某些基因，尤其是第二亞組(PAX2、PAX5、PAX8)和第三亞組(PAX3、PAX7)基因，已被公認在人類的腎癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、黑素瘤等惡性腫瘤中起關鍵作用。

PAX2位于10q24-25，長約70kb，由12個外顯子組成,分子量44.7kDa，是泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)生和發(fā)育至關重要的轉錄因子。在發(fā)育中的泌尿生殖系統(tǒng)中，PAX2廣泛表達于腎的導管和實質細胞，卵巢和輸卵管的上皮細胞及子宮內膜。腎臟、卵巢和子宮的腫瘤均可見PAX2的表達，尤其是腎透明細胞癌、子宮和卵巢的子宮內膜樣癌和漿液性癌有較高的表達率。膀胱尿路上皮癌和乳腺癌均不表達PAX2。基于PAX2的表達特征，抗PAX2的單抗在病理診斷中的主要應用包括：(1)與RCC、CD10、CD117、MOC31等聯(lián)合使用，用于腎細胞腫瘤的分類；(2)用于肝細胞癌與轉移性腎透明細胞癌的鑒別；(3)用于卵巢漿液性癌(PAX2陽性)與卵巢轉移性乳腺癌(PAX2陰性)的鑒別診斷；(4)與PTEN聯(lián)合使用可鑒別內膜的非典型增生與良性增生，非典型增生表達缺失或減少。

免疫組化病理建立在蛋白質水平上，可以進一步判斷腫瘤的組織來源、原發(fā)部位、病理分型、殘留邊緣癌細胞等，除了診斷作用以外還具有指導預后的作用。精準醫(yī)療要求提高病理診斷的精確性，究其核心免疫組化病理需要有特異性強，靈敏度高的抗體，尤其是單克隆抗體。多克隆抗體多是免疫動物如兔子或羊等，利用親和層析法等純化血清獲得多抗，盡管開發(fā)的周期短，抗體可以識別更多的抗原表位，但是也存在不易控制批間差，容易產生非特異性背景等問題。與多抗相比，單抗特異性更強，不易產生非特異性背景，生產更容易實現規(guī)模化生產，且容易控制批間差。

作為同一亞組的成員PAX2與PAX5、PAX8具有較高的同源性高，但是三者的表達譜不同，在病理診斷中具有不同的應用價值，開發(fā)特異性的抗體非常關鍵。由于三者同源性高開發(fā)過程較難獲得只特異性識別PAX2的克隆，NordiQC的信息也表明IHC應用中目前缺乏特異的抗PAX2的單抗，PAX2幾乎在所有腎上皮性腫瘤中均呈現高表達，但是在尿路上皮癌中陰性。PAX8與PAX2的表達相似，但PAX8在尿路上皮癌中可陽性表達。所以在腎臟腫瘤的診斷中PAX2相對PAX8更具有優(yōu)勢，但是由于缺乏特異性的PAX2單抗，目前在腎臟腫瘤的診斷中以PAX8的應用為主，在尿路上皮癌的診斷中需要聯(lián)合使用RCC、CA IX等抗體。

發(fā)明內容