[發明專利]間皮素特異性外泌體載體、包含其的載藥外泌體、其制備方法及其醫藥用途

在審

• 申請號: 202211000226.2
• 申請日: 2022-08-19
• 公開（公告）號: CN116036299A
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 鮑會靜;李明莉;胡東生;王西墨
• 申請（專利權）人: 天津市中西醫結合醫院（天津市南開醫院）
• 主分類號: A61K47/46
• 分類號: A61K47/46;A61K47/42;A61K45/00;A61K31/37;A61K31/704;A61K31/585;A61P35/00;A61P37/02;A61P1/00;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 黃謙;張函

本發明提供了一種外泌體載體，其包含間皮素(MSLN)特異性嵌合抗原受體，其中，所述嵌合抗原受體包括跨膜部分和展示于外泌體膜表面的抗MSLN單鏈抗體，所述跨膜部分為人CD63。本發明還提供了包含該外泌體載體的載藥外泌體、藥物組合物及其醫藥用途。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種間皮素特異性外泌體載體、包含其的載藥外泌體、其制備方法及其醫藥用途。

背景技術

為解決常規給藥藥物利用率低的特點，近年來，納米技術包納藥物的研究十分火熱，并在藥物緩釋及遞送方面已取得較好的研究成果。但由于納米顆粒為外源性物質，具有免疫原性，無法逃避體內巨噬細胞的吞噬作用，因此體內循環穩定性差，利用度低，甚至可能造成機體排異損傷，影響其最終的治療效果。外泌體最早發現于體外培養的綿羊紅細胞上清液中，是細胞主動分泌的大小均一、直徑在30-150nm之間的小囊泡。外泌體可以攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA，參與細胞之間的信號傳導與交流。所有人體細胞都能分泌，其可攜帶不同的蛋白質和核酸，起著細胞間通訊的作用。外泌體作為自身細胞分泌物，生物穩定性好，滲透性強，是一種理想的藥物遞送載體。故可利用外泌體作為載藥系統，能最大限度地發揮其治療作用。

實際上，探討外泌體作為載體的研究已經越來越多。Dai,S.報道了通過基因工程使人結腸癌細胞LS-174T所分泌的外泌體內含有大量IL-18，可以有效的促進T細胞增殖以及IFN-γ釋放，從而達到殺傷抑制腫瘤細胞的目的。當外泌體中高表達miR-122、miR-134、miR146b或是anti-miR-9等時，均可在抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡或者是增強藥物敏感性等方面發揮抗腫瘤的作用。2015年Yang，T報道了當用腦內皮細胞分泌的外泌體包裹化療藥物阿霉素和紫杉醇后，可以使藥物通過血腦屏障，該發現對基于外泌體的治療研究意義重大，提示外泌體作為藥物運輸載體具有非常大的應用潛能。2016年，Kim,M.S等人發表于nanomedicine上的文章顯示應用巨噬細胞細胞系Raw264.7所分泌的外泌體包裹紫杉醇可以有效的殺傷多藥耐藥的腫瘤細胞，該研究證實了以外泌體作為化療藥物的運輸載體的高效性。除此之外，Toffoli的研究證明當用外泌體包裹阿霉素的時候，可以有效的降低阿霉素的心臟毒性。但是單純使用外泌體作為運藥載體并無腫瘤細胞靶向性的作用，因此無法實現藥物在腫瘤部位的富集。

卵巢癌是婦科癌癥最為常見的一種惡性腫瘤,由于其發病隱匿，臨床癥狀、體征不典型且缺乏有效的早期診斷方法，故80％的卵巢癌患者在確診時已屬晚期，晚期卵巢癌5年生存率不到30％。目前卵巢癌的主要治療策略以減瘤術聯合化療為主，主要以紫杉醇聯合卡鉑進行化療，但是傳統化療藥物無法直接靶向腫瘤細胞，只能進行無選擇性的細胞殺傷，在殺死腫瘤細胞的同時也會殺死正常的細胞，使身體的免疫力低下。同時化療治療的患者絕大部分會出現惡心、嘔吐、便秘、腹瀉等胃腸道反應癥狀。因此尋找一種可精準殺傷腫瘤細胞的同時能夠降低患者胃腸道反應，提高患者生活質量的治療方法就顯得至關重要。

間皮素(MSLN)是一種在分離單克隆抗體K1(MabK)時發現的細胞表面表達的糖蛋白，其僅在體腔的間皮細胞中表達，在惡性間皮瘤、卵巢惡性腫瘤、胰腺癌中呈現高度表達。MSLN基因是卵巢癌患者體內表達上調最顯著的基因之一。目前的研究顯示，MSLN可作為卵巢癌的腫瘤標志物及其預后預測指標。

蛇床子素又名甲氧基歐芹酚或歐芹酚甲醚，是從傘形科植物中提取分離的純天然香豆素類化合物。研究表明蛇床子素具有抗腫瘤、抗骨質疏松、抗肝炎、抗變態反應、抑制血小板聚集，以及抗病毒、抗誘變等多種藥理活性。

發明內容

本公開提供了一種外泌體載體，其包含間皮素(MSLN)特異性嵌合抗原受體，其中，所述嵌合抗原受體包括跨膜部分和展示于外泌體膜表面的抗MSLN單鏈抗體，所述跨膜部分為人CD63。

在一些實施方案中，所述人CD63的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。