[發明專利]PRMT5基因敲除DF-1細胞株的構建方法及其應用在審
| 申請號： | 202210994467.7 | 申請日： | 2022-08-18 |
| 公開（公告）號： | CN116064525A | 公開（公告）日： | 2023-05-05 |
| 發明（設計）人： | 吳歡生;鄔向東;游洪南;胡西鳳 | 申請（專利權）人： | 江西農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129 | 代理人： | 阮錦華 |
| 地址： | 330045 江西省南昌市昌北經濟*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | prmt5 基因 df 細胞株 構建 方法 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種靶向敲除雞源PRMT5基因的sgRNA序列，其特征在于，其核苷酸序列為SEQ?IDNo.1。
2.如權利要求1中所述靶向敲除雞源PRMT5基因的sgRNA序列在制備敲除雞源PRMT5基因的細胞株中的應用。
3.一種敲除雞源PRMT5基因的DF-1細胞株的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)根據上述靶向敲除雞源PRMT5基因的sgRNA序列，設計兩條反向互補核苷酸鏈并將二者混合退火形成雙鏈；
2)將步驟1)所得的雙鏈與CRISPR/Cas9載體連接，得到重組敲除表達載體；
3)將步驟2)所得重組敲除表達載體轉染雞成纖維細胞系，培養篩選，得到敲除雞源PRMT5基因的DF-1細胞株。
4.根據權利要求3所述敲除雞源PRMT5基因的DF-1細胞株的構建方法，其特征在于，步驟2)所述CRISPR/Cas9載體為lentiCRISPRv2載體；步驟3)所述雞成纖維細胞系為處于對數生長期的細胞；步驟3)所述篩選為嘌呤霉素篩選。
5.一種敲除雞源PRMT5基因的DF-1細胞株，其特征在于，通過權利要求3或4所述構建方法得到。
6.如權利要求5所述敲除雞源PRMT5基因的DF-1細胞株在干擾素調節信號通路研究中的應用。
7.如權利要求5所述敲除雞源PRMT5基因的DF-1細胞株在傳染性法氏囊病病毒復制研究中的應用。
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