[發明專利]超高效液相高分辨質譜非靶標代謝組學的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202210993661.3
• 申請日: 2022-08-18
• 公開（公告）號: CN115932066A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 鄧軍亮;杜杰;鐘召赟
• 申請（專利權）人: 上海百趣生物醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 陶亮

本發明公開了一種超高效液相高分辨質譜非靶標代謝組學的檢測方法，包括以下步驟：代謝物提取，上機檢測和數據處理，本發明采用超高效液相色譜與高分辨質譜儀聯用，可以改善低濃度代謝物檢測的全面性，提高檢測的準確度。并且采用包含25mmol/L乙酸銨和25mmol/L氨水的水溶液作為A相，可以改善檢測系統的穩定性。同時采用2.1mm×100mm,1.7μm規格的色譜柱，可以很好的控制物質的殘留，使樣品間的交叉污染控制在可控范圍。本發明的內標在QC樣品中的保留時間和響應強度穩定性很好，儀器數據采集穩定性很好。

技術領域

本發明涉及一種超高效液相高分辨質譜非靶標代謝組學的檢測方法及應用，涉及G01N，具體涉及借助于測定材料的化學或物理性質來測試或分析材料。

背景技術

代謝組學來源于代謝組，是指某一生物組分在生理時期內產生的低分子量的代謝產物，代謝組學是通過對生物特定生理時期內的所有低分子量代謝產物進行定性和定量分析的一門學科。代謝產物的變化與生物體內的細胞代謝，病變或其他因素的改變息息相關，因此通過對代謝產物進行分析，代謝組學有望可以成為一種準確診斷疾病的方式。但是目前的檢測方法中，由于代謝產物的濃度較低，進行檢測時，可檢測到的代謝產物種類較少，不能達到檢測方法的最低檢出限，代謝產物的檢測不全面，不能達到全面的分析。通過優化設備，采用檢出限低，分辨率高的檢測儀器可以實現完善檢測物質全面性的效果，但是現有的檢測方法不穩定，相同樣品間檢測的差異性較大。

中國發明專利CN114152696A公開了一種對牛肌肉中多種PPCPs的非靶標篩查方法，采用代謝組學分析方法將篩查非靶標污染物的過程轉變為尋找所謂的“標志化合物”過程，有效提高非靶標篩查效率，但是此方法僅針對PPCPs代謝物進行檢測，檢測結果對于樣品分析具有一定片面性。中國發明專利CN106855552B公開了一種利用非靶標代謝組學技術鑒別蜂蜜品種的方法，利用t-test初步篩選出特征標志物，以實現不同品種蜂蜜的特征標志物的確定，但是采用的檢測儀器為高效液相色譜，對于低含量的代謝物檢測可能會被忽視。

發明內容

為了提高非靶標代謝組學分析的準確性，改善低檢測限在檢測過程中的穩定性，本申請的第一個方面提供了一種超高效液相高分辨質譜非靶標代謝組學的檢測方法，包括以下步驟：

(1)代謝物提取：將待測樣品與提取液混合，加入同位素標記內標混合，旋渦混勻20-40s，然后超聲，靜置，離心，取上清液；

(2)上機檢測：將上清液加入超高效液相色譜-高分辨質譜中，根據設置的程序進行檢測；

(3)數據處理：將得到的原始數據經軟件轉成mzXML格式，然后進行峰識別，峰提取，峰對齊，積分的處理，，然后與質譜數據庫匹配進行物質注釋。

作為一種優選的實施方式，所述同位素標記內標包括0.6μmol/L的煙酰胺-2,4,5,6-d₄，0.06μmol/L的乙酰膽堿-d₉氯化物，8.00μmol/L的L-亮氨酸-5,5,5-d₃，0.04μmol/L的鄰氨基苯甲酸-環-¹³C₆，4.00μmol/L的[¹³C₃]-L-(+)-乳酸鈉，12.00μmol/L的L-谷氨酸-¹³C₅,¹⁵N。

作為一種優選的實施方式，所述提取液選自甲醇、乙腈、水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或幾種的組合。

作為一種優選的實施方式，當樣品為液體樣品時，所述提取液為甲醇和乙腈的組合，所述甲醇和乙腈的體積比為(0.5-1.5)：(0.5-1.5)。

作為一種優選的實施方式，當樣品為液體樣品時，甲醇和乙腈的體積比為1：1。