[發明專利]一種磺胺二甲嘧啶降解菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210979877.4
• 申請日: 2022-08-16
• 公開（公告）號: CN115141782A
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 林輝;張錦;成琪璐;馬軍偉;俞巧鋼;孫萬春;葉靜;王強;鄒平;陳照明;馬進川;王峰;劉洋之
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C02F11/02;C02F103/20;C12R1/01;C12R1/06;C12N1/36;C12N1/02
• 代理公司: 杭州恒翌專利代理事務所(特殊普通合伙) 33298
• 代理人: 柯奇君

1.一種磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑，其特征在于，包括原玻璃蠅節桿菌（Arthrobacterprotophormiae）和不動桿菌（Acinetobacter sp.）；原玻璃蠅節桿菌（Arthrobacterprotophormiae）保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.25224；不動桿菌（Acinetobacter sp.）保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.25225。

2.根據權利要求1所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑，其特征在于由原玻璃蠅節桿菌（Arthrobacter protophormiae）、不動桿菌（Acinetobacter sp.）、紡綞形賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus fusiformis）和微桿菌（Microbacterium mitrae）組成。

3.根據權利要求1所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑，其特征在于原玻璃蠅節桿菌（Arthrobacter protophormiae）、不動桿菌（Acinetobacter sp.）、紡綞形賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus fusiformis）和微桿菌（Microbacterium mitrae）從畜禽糞便中馴化、篩選得到。

4.根據權利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑，其特征在于，原玻璃蠅節桿菌（Arthrobacter protophormiae）、不動桿菌（Acinetobacter sp.）、紡綞形賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus fusiformis）和微桿菌（Microbacterium mitrae）從豬糞中馴化、篩選得到。

5.根據權利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑，其特征在于，混合菌劑由各菌種等比例混合組成。

6.如權利要求1所述磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑的馴化和篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）稱取冷藏豬糞樣品于容器中，加入無菌水（糞便：水=1:9，v:v），室溫振蕩，濾紙過濾獲得豬糞廢水懸液1，滅菌處理；

2）取冷藏豬糞按照1:1與水混合，室溫振蕩，靜置后取上清，獲得豬糞懸濁液2；

3）取滅菌處理的豬糞廢水懸液1，加磺胺二甲嘧啶，并加豬糞懸濁液2，避光震蕩培養；

4）培養結束后，取培養物涂布到含有磺胺二甲嘧啶的LB平板上，挑取單菌落到含有磺胺二甲嘧啶的LB培養基中，培養若干天后測定抗生素降解率；

5）選取可降解抗生素的菌種，提取細菌總DNA，用通用引物進行PCR擴增后，進行測序、同源性比對，確定降解菌的種屬。

7.根據權利要求6所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑的馴化和篩選方法，其特征在于，還包括步驟6），篩選獲得的磺胺二甲嘧啶降解菌，制定菌劑組合方案；將菌劑組合接種到豬糞廢水懸液中，避光震蕩培養后，測定磺胺二甲嘧啶降解率；通過對比磺胺二甲嘧啶降解率，獲得權利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑。

8.根據權利要求6或7所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑的馴化和篩選方法，其特征在于，步驟1）中，糞便：水=1:9，v:v；滅菌溫度不低于120℃；步驟2）中，冷藏豬糞與水1:1混合；步驟6）中，將菌劑組合按照1%接種到豬糞廢水懸液中。

9.權利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌劑在畜禽糞污抗生素去除中的應用。