[發明專利]胃癌早期篩查的DNA甲基化標志物組合及試劑盒

有效

• 申請號: 202210978714.4
• 申請日: 2022-08-16
• 公開（公告）號: CN115786503B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 王傳新;杜魯濤;李培龍;李娟
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 劉慶蘭

本發明屬于腫瘤分子生物學技術領域，涉及一種用于胃癌早期篩查的DNA甲基化標志物組合及試劑盒。包括KLRK1基因chr12_10541790位點、TRDJ3基因chr14_22927264位點和chr14_22926867位點、TRDC基因chr14_22931150位點的甲基化檢測引物對及探針。本發明提供了一種用于胃癌早期篩查的試劑盒，能夠對疑似胃癌病人的外周血單個核細胞基因組DNA進行檢測以篩查胃癌，檢測靈敏度能夠達到81.65％，特異性能達到81.35％。本發明提供的檢測方法操作簡便、快速，安全無創，僅需要3?mL血也便可完成檢測，在減少患者痛苦的基礎上能夠得到準確的檢測結果，具有很高的臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學技術領域，涉及一種用于胃癌早期篩查的DNA甲基化標志物組合及試劑盒。

背景技術

胃癌（gastric?cancer）是消化系統最為常見的惡性腫瘤之一，也是全球第五常見的惡性腫瘤，其病死率在惡性腫瘤中排第四位，嚴重威脅人類的生命健康。胃癌的發生是一個多因素共同參與的復雜過程，其發病主要與幽門螺桿菌感染、飲食、生活方式及遺傳等因素密切相關，尤其易發生在老年人之中，且男性發病率顯著高于女性。胃癌的早期發現和治療對于改善患者的預后至關重要，早期胃癌的5年生存率可以達到95%以上。然而，由于胃癌起病隱匿，早期通常沒有臨床癥狀或僅表現出非特異性臨床癥狀，因此在患者初診時可能已經達到晚期，這使得胃癌的早期診斷和治療受到極大的限制，總體預后不良。目前常用來診斷胃癌的幾種診斷方法在臨床應用方面存在著不同程度的局限性：胃鏡檢查價格昂貴、創傷性大、病人依從性差；血清腫瘤標志物（如胃蛋白酶原、幽門螺桿菌抗體、CEA、CA19-9等）檢測及靈敏度低、特異性差；CT檢查對早期診斷有限，對細小腫塊較易出現漏診。因此，尋找非侵入性、高靈敏度和高特異度的新型標志物用于無創性胃癌篩查早期診斷，是目前臨床上亟需解決的問題。

表觀遺傳學（epigenetics）是一門新興學科，其定義為不涉及基因組的堿基序列改變的情況下，基因的表達發生改變。DNA甲基化是一個重要的表觀遺傳因素，指在DNA甲基化轉移酶的作用下，在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5'碳位共價鍵結合一個甲基基團。大量研究證實，DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變，從而控制基因表達，啟動子區域的異常甲基化可導致癌基因的激活或抑癌基因的沉默。由于DNA甲基化往往發生在癌癥發生過程的早期，所以在腫瘤診斷中應用越來越廣泛，可作為胃癌早期篩查的可靠途徑。

外周血單個核細胞（peripheral?blood?mononuclear?cell,?PBMC），即外周血中具有單個核的細胞，主要包括淋巴細胞（T/B）、單核細胞、吞噬細胞、樹突狀細胞和其他少量細胞類型，其中淋巴細胞約占70%~90%。已有研究發現，在腫瘤發生發展中，DNA甲基化通過調控免疫細胞功能，如介導細胞分化、成熟、浸潤等，參與機體對腫瘤的免疫應答，PBMC的甲基化研究能夠為腫瘤的早期無創性診斷和免疫治療監測提供新的方法。

發明內容

本發明針對傳統胃癌診斷中存在的具有侵入性、費時費力、準確性低等問題提出一種新型的用于胃癌早期篩查的DNA甲基化標志物組合及試劑盒。

為了達到上述目的，本發明是采用下述的技術方案實現的：

本發明提供一種用于胃癌早期篩查的甲基化位點組合，所述組合包括KLRK1基因啟動子區的chr12_10541790、TRDJ3基因啟動子區的chr14_22927264和chr14_22926867、TRDC基因啟動子區的chr14_22931150。

本發明還提供了用于胃癌早期篩查的甲基化檢測引物及探針組合，所述組合包括用于檢測所述位點甲基化水平的特異性引物和探針。

所述KLRK1基因啟動子區chr12_10541790的甲基化檢測引物對序列為5'-GATAATAATATATTTAGTTTTTTGTTTATAGTCG-3'和5'-AACTAAATTATTACCAAATAAAATAAACAACT-3'；