[發明專利]胃癌早期篩查的DNA甲基化標志物組合及試劑盒

有效

• 申請號: 202210978714.4
• 申請日: 2022-08-16
• 公開（公告）號: CN115786503B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 王傳新;杜魯濤;李培龍;李娟
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 劉慶蘭

1.檢測人外周血樣本單個核細胞中KLRK1基因的chr12_10541790位點、TRDJ3基因的chr14_22927264位點和chr14_22926867位點、TRDC基因的chr14_22931150位點甲基化狀態的物質在制備胃癌早期篩查試劑或試劑盒中的應用。

2.一種胃癌早期篩查試劑盒，其特征在于，包括KLRK1基因chr12_10541790位點、TRDJ3基因chr14_22927264位點和chr14_22926867位點、TRDC基因chr14_22931150位點的甲基化檢測引物對及探針，其中，

所述KLRK1基因chr12_10541790位點的甲基化檢測引物對包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示；

所述KLRK1基因chr12_10541790位點的甲基化探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示；

所述TRDJ3基因chr14_22927264位點的甲基化檢測引物對包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.4和SEQ?ID?No.5所示；

所述TRDJ3基因chr14_22927264位點的甲基化探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.6所示；

所述TRDJ3基因chr14_22926867位點的甲基化檢測引物對包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.7和SEQ?ID?No.8所示；

所述TRDJ3基因chr14_22926867位點的甲基化探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.9所示；

所述TRDC基因chr14_22931150位點的甲基化檢測引物對包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.10和SEQ?ID?No.11所示；

所述TRDC基因chr14_22931150位點的甲基化探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.12所示。

3.根據權利要求2所述胃癌早期篩查試劑盒，其特征在于，還包括內參基因ACTB的甲基化檢測引物對和探針，正向引物和反向引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.13和SEQ?IDNo.14所示；探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.15所示。

4.根據權利要求3所述胃癌早期篩查試劑盒，其特征在于，KLRK1基因chr12_10541790位點、TRDJ3基因chr14_22927264位點和chr14_22926867位點、TRDC基因chr14_22931150位點甲基化探針的5'端均標記有熒光基團FAM，3'端均標記有淬滅基團BHQ1；內參基因ACTB基因的5'端標記有熒光基團VIC，3'端標記有淬滅基團BHQ1。

5.根據權利要求4所述胃癌早期篩查試劑盒，其特征在于，還包括陽性質控品和陰性質控品，所述陽性質控品為亞硫酸氫鹽修飾的全甲基化人類基因組DNA，所述陰性質控品為亞硫酸氫鹽修飾的非甲基化人類基因組DNA。

6.根據權利要求4所述胃癌早期篩查試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括一個診斷模型，公式如下：

ΔCt=VIC熒光通道的Ct值-FAM熒光通道的Ct值；

VIC熒光通道的Ct值≤35，ΔCt＞2.0157，則結果為陽性；

VIC熒光通道的Ct值≤35，ΔCt≤2.0157，則結果為陰性；

VIC熒光通道的Ct值35或無擴增，ΔCt為任何結果，結果皆為無效，需要重新提取轉化樣本后檢測；

若判讀結果為陰性，代表患胃癌的風險低；若判讀結果為陽性，代表患胃癌的風險高。