[發(fā)明專利]高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株及構(gòu)建方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210978312.4
• 申請(qǐng)日: 2022-08-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115820705A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程景勝;高庚榮;丁明珠;元英進(jìn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/75
• 分類號(hào): C12N15/75;C12N15/31;C12N15/54;C12N15/52;C12N15/113;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/125
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除菌株CGF01的srfAB-srfAC基因片段，敲除pksBCDE基因片段，用P_veg啟動(dòng)子替換天然啟動(dòng)子P_fenC，得到高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株，命名為CGF04；

所述srfAB-srfAC基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述pksBCDE基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的P_veg啟動(dòng)子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述的P_fenC啟動(dòng)子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.權(quán)利要求1的方法構(gòu)建的高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌CGF04。

3.權(quán)利要求2所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)豐原素的用途。

4.一種高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：對(duì)菌株CGF04利用P43啟動(dòng)子過(guò)表達(dá)乙酰輔酶A羧化酶基因accBC和3-氧酰基-ACP合酶III基因fabHB，得到高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株，命名為CGF16；所述基因accBC由基因accB和基因accC組成；

所述P43啟動(dòng)子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

5.權(quán)利要求4的方法構(gòu)建的高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌CGF16。

6.權(quán)利要求5所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)豐原素的用途。

7.一種高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：對(duì)菌株CGF16，敲除生物膜形成相關(guān)基因片段tapA-sipW-tasA，敲除基因片段epsAB和敲除孢子形成相關(guān)基因spoIIIE，得到高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌菌株，命名為CGF26；基因片段epsAB由基因epsA和基因epsB組成。

8.權(quán)利要求7的方法構(gòu)建的高產(chǎn)豐原素的枯草芽孢桿菌CGF26。

9.權(quán)利要求8所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)豐原素的用途。