[發明專利]一種人原代細胞分離試劑盒及分離方法

在審

• 申請號: 202210970073.8
• 申請日: 2022-08-12
• 公開（公告）號: CN115651889A
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 沈超;熊君;廖聰
• 申請（專利權）人: 元道生命科技(武漢)有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 深圳泛航知識產權代理事務所(普通合伙) 44867
• 代理人: 鄧愛軍

本發明涉及一種人原代細胞分離試劑盒及分離方法，試劑盒包括：組織處理液、細胞消化液和細胞獲取液；所述組織處理液的組分包括平衡鹽溶液、青霉素、鏈霉素和兩性霉素；所述細胞消化液由消化酶、血清和基礎培養基組成；所述細胞獲取液的組分為人組織細胞培養基。本發明提供的人原代細胞分離試劑盒，可快速高效的從人組織中獲得原代細胞。

技術領域

本發明涉及人原代細胞分離技術領域，特別是涉及一種人原代細胞分離試劑盒及分離方法。

背景技術

人原代細胞是指從人體取細胞、組織或器官直接培養的細胞，一般把培養的第1代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞。原代細胞因保持有原有細胞的基本性質，可廣泛應用于藥物篩選、藥物代謝、毒理研究和癌癥藥物研究。

常用的人原代細胞分離方法有組織貼塊法和消化分散細胞法。由于組織貼塊法細胞爬出較慢，細胞老化和細胞污染(多種細胞同時生長)情況嚴重，人們大多選擇消化分散細胞法。單一的消化酶消化原代細胞會出現細胞消化過度或者細胞消化不完全，導致分離出來的細胞不貼壁或者數量稀少，最后細胞凋亡。多種消化酶聯合使用可以最大化的消化細胞，但又能減少對細胞損傷，保證細胞活性。

盡管目前人原代細胞分離技術已有很大發展，但在實際操作中，由于各技術人員對人原代細胞分離技術了解不同，無法做到最佳分離效果。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的是提供一種人原代細胞分離試劑盒。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

一種人原代細胞分離試劑盒，包括：組織處理液、細胞消化液和細胞獲取液；

所述組織處理液的組分包括平衡鹽溶液、青霉素、鏈霉素和兩性霉素；所述細胞消化液由消化酶、血清和基礎培養基組成；所述細胞獲取液的組分為人組織細胞培養基。

優選地，所述組織處理液的具體成分濃度為：500-50U/ml的所述青霉素、500-50mg/ml的所述鏈霉素和1-4ug/ml的所述兩性霉素。

優選地，所述細胞消化液中的消化酶的濃度為0.1-0.25％，血清濃度為10-20％，基礎培養基為DMEM/F12。

優選地，所述消化酶包括胰酶和Ⅰ型膠原酶。

優選地，所述人組織細胞培養基由基礎培養基和血清組成。

一種人原代細胞分離方法，包括：

將人組織置于培養皿中，加入組織處理液對所述人組織進行漂洗和浸泡，并在漂洗和浸泡之后棄去所述組織處理液；

將經漂洗和浸泡后的人組織中加入4-10ml細胞消化液，并將所述人組織進行剪裁，得到組織碎片，并將所述細胞消化液和所述組織碎片置于37℃、5％CO₂的孵箱中孵育1-4h；

利用移液管對所述細胞消化液和所述組織碎片進行吹打，并利用目網篩對吹打后的組織液體進行過濾，并進行離心，以去除上清液；

將去除上清液的組織液體中加入人細胞，并獲取重懸細胞，對所述重懸細胞進行離心，以去除上清液得到細胞沉淀，將所述細胞沉淀加入至培養基進行重懸，并進行接種培養，以獲得分離后的人原代細胞。

根據本發明提供的具體實施例，本發明公開了以下技術效果：

本發明提供了一種人原代細胞分離試劑盒及分離方法，試劑盒包括：組織處理液、細胞消化液和細胞獲取液；所述組織處理液的組分包括平衡鹽溶液、青霉素、鏈霉素和兩性霉素；所述細胞消化液由消化酶、血清和基礎培養基組成；所述細胞獲取液的組分為人組織細胞培養基。本發明提供的人原代細胞分離試劑盒，可快速高效的從人組織中獲得原代細胞。

具體實施方式