[發明專利]一種人原代細胞分離試劑盒及分離方法在審
| 申請號： | 202210970073.8 | 申請日： | 2022-08-12 |
| 公開（公告）號： | CN115651889A | 公開（公告）日： | 2023-01-31 |
| 發明（設計）人： | 沈超;熊君;廖聰 | 申請（專利權）人： | 元道生命科技(武漢)有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 深圳泛航知識產權代理事務所(普通合伙) 44867 | 代理人： | 鄧愛軍 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市武漢東湖新技術開發區高新大道*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 人原代 細胞 分離 試劑盒 方法 | ||
1.一種人原代細胞分離試劑盒，其特征在于，包括：組織處理液、細胞消化液和細胞獲取液；
所述組織處理液的組分包括平衡鹽溶液、青霉素、鏈霉素和兩性霉素；所述細胞消化液由消化酶、血清和基礎培養基組成；所述細胞獲取液的組分為人組織細胞培養基。
2.根據權利要求1所述的人原代細胞分離試劑盒，其特征在于，所述組織處理液的具體成分濃度為：500-50U/ml的所述青霉素、500-50mg/ml的所述鏈霉素和1-4ug/ml的所述兩性霉素。
3.根據權利要求1所述的人原代細胞分離試劑盒，其特征在于，所述細胞消化液中的消化酶的濃度為0.1-0.25％，血清濃度為10-20％，基礎培養基為DMEM/F12。
4.根據權利要求3所述的人原代細胞分離試劑盒，其特征在于，所述消化酶包括胰酶和Ⅰ型膠原酶。
5.根據權利要求1所述的人原代細胞分離試劑盒，其特征在于，所述人組織細胞培養基由基礎培養基和血清組成。
6.一種人原代細胞分離方法，其特征在于，包括：
將人組織置于培養皿中，加入組織處理液對所述人組織進行漂洗和浸泡，并在漂洗和浸泡之后棄去所述組織處理液；
將經漂洗和浸泡后的人組織中加入4-10ml細胞消化液，并將所述人組織進行剪裁，得到組織碎片，并將所述細胞消化液和所述組織碎片置于37℃、5％CO2的孵箱中孵育1-4h；
利用移液管對所述細胞消化液和所述組織碎片進行吹打，并利用目網篩對吹打后的組織液體進行過濾，并進行離心，以去除上清液；
將去除上清液的組織液體中加入人細胞，并獲取重懸細胞，對所述重懸細胞進行離心，以去除上清液得到細胞沉淀，將所述細胞沉淀加入至培養基進行重懸，并進行接種培養，以獲得分離后的人原代細胞。
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