[發明專利]一種蜂房活性成分的制備和分析方法

在審

• 申請號: 202210969924.7
• 申請日: 2022-08-12
• 公開（公告）號: CN115403550A
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 王一飛;劉濤;曾禧銘;葉翠芳
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40;C07D319/20;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;A61P39/06;A61P29/00
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 徐翔

本發明公開了一種蜂房活性成分的制備和分析方法，首先將蜂房晾干后打粉，進行有機溶劑提取；然后提取物進行有機溶劑萃取；對萃取物分離，分離純化，得到單體化合物并經核磁共振鑒定結構。通過DPPH自由基清除實驗和LPS誘導的RAW 264.7細胞炎癥NO抑制實驗，檢測出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物；采用高效液相色譜分析了黃腳胡蜂酯部位的指紋圖譜并開發了活性成分的分析方法，評估了不同蜂房與黃腳胡蜂蜂房的成分相似度。以酰胺類化合物為蜂房質量控制成分，對虎貞清風膠囊進行質量分析。本發明開發了蜂房的抗氧化和消炎鎮痛活性成分的制備與分析方法，可應用于蜂房質量分析和預防、治療痛風性關節炎的藥物開發。

技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及一種蜂房中活性成分的制備和分析方法。

背景技術

蜂房是胡蜂科昆蟲果馬蜂Polistes olivaceous(DeGeer)、日本長腳胡蜂Polistes japonicus Saussure或異腹胡蜂Parapolybia varia Fabricius等的巢。中醫上可以入藥，常與其他中藥配伍，具有祛風除濕，消炎鎮痛等功效，主要應用于治療齲齒牙痛，痤瘡和乳腺炎等疾病。現代研究表明蜂房中含有黃酮類、酰胺類、萜類以及高級脂肪酸成分，藥理實驗證明蜂房提取物具有消炎止痛、抗栓通脈、止癢消腫和抗腫瘤等生物活性。

蜂房具有悠久的藥用歷史，《神農本草經》中，謂之“味苦平，主驚癇瘈疭，寒熱邪氣，癲疾，鬼精，蠱毒腸痔”等。目前，根據蜂房的藥用活性，對蜂房已進行了大量的研究，開發出了虎貞清風膠囊、肺心夏治膠囊、麝香風濕片、慈丹膠囊和香鹿益陽膠囊等藥物；中國專利CN109722354A公布了一種蜂房提取物抑菌皂及其制備方法，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和銅綠假單胞菌均有抑制作用。中國專利CN113679742A公開了一種蜂房醇提物的制備方法及應用，該醇提物具有降尿酸的作用，可用于預防、治療高尿酸血癥和痛風。中國專利CN106806477A公開了一種治療風濕骨痛的蜂房煎液的制備方法，對風濕骨痛，關節痛、腰腿痛具有治療效果，可應用于相關藥物開發；中國專利CN104474207A公開了一種含有野蜂房的治療扭傷的中藥組合物的制備方法和應用，對扭傷患者具有低劑量、高活性的治療效果，且副作用小；中國專利CN105560521A公開一種三黃蜂房治療疔瘡的中藥組合物的制備方法，該中藥組合物具有止痛消散、拔毒提膿的功效。蜂房含有豐富的活性成分，已對蜂房的活性提取物進行了大量的開發，但對于蜂房有效成分的開發還不夠深入，質量研究還不夠全面。為了進一步對蜂房中的活性成分進行開發，研究活性單體化合物的制備和分析方法，將為蜂房質量分析和藥物研發提供參考。

發明內容

本發明公開了一種蜂房中活性成分的制備和分析方法，具體為蜂房中抗氧化活性和抗炎活性成分的制備和分析方法。

本發明的采用的方法如下：

一種蜂房活性成分的制備方法，包括以下步驟：

(1)取晾干的蜂房，采用有機溶劑結合超聲提取，收集提取液經濃縮得到提取物；

(2)將提取物用有機溶劑萃取，收集濃縮得到萃取物；

(3)運用活性指導，采用柱色譜層析、高效液相制備純化得到活性化合物。

進一步地，

在所述步驟(1)中，首先需要將晾干的蜂房粉碎后過20目藥篩，然后加入8倍體積的有機溶劑50％甲醇水溶液進行浸泡24h后超聲1h，共提取三次，濃縮后得到提取物。

進一步地，

在所述步驟(2)中，將提取物溶于8倍重量的純水中，用有機溶劑乙酸乙酯進行萃取，得到乙酸乙酯萃取部位和水部位。

進一步地，

對所述步驟(3)中獲得的活性化合物進行DPPH清除實驗和LPS誘導的RAW 264.7細胞炎癥NO抑制實驗，檢測出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物。