[發(fā)明專利]一種羊支原體肺炎平板凝集抗原及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210968535.2
• 申請日: 2022-08-12
• 公開（公告）號: CN115097146A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈青春;蔣卉;丁家波;范學政;鑫婷;張廣智;秦彤;湯新明;梁瑞英;梁琳;李松勵
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/531;C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 成都宏田知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51337
• 代理人: 常利敏

本發(fā)明公開了一種羊支原體肺炎平板凝集抗原及其制備方法與應(yīng)用。其中羊支原體肺炎平板凝集抗原使用絲狀支原體山羊亞種SZ013株、山羊支原體山羊亞種SY006株和綿羊肺炎支原體MY018株制成，其中3種支原體菌體的滅活前濃度均為7.0×10¹⁰CCU/mL。本申請?zhí)峁┑难蛑гw肺炎平板凝集抗原，相比當前的羊支原體病檢測試劑產(chǎn)品，具有檢測范圍較廣的特點，能同時檢測3種支原體感染，而且使用簡單、直觀，普通飼養(yǎng)員，按照說明書即可使用，并進行結(jié)果判定。對于養(yǎng)殖企業(yè)和農(nóng)戶來講，只需立即確定羊群是否有支原體感染即可，無需確定由何種支原體感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸醫(yī)診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種羊支原體肺炎平板凝集抗原及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

羊支原體肺炎，又稱羊傳染性胸膜肺炎，是由支原體引起的一種高度接觸性傳染病，臨床上表現(xiàn)為高熱、咳嗽胸腔漿液性和纖維素性炎癥，傳入性強，急性病例表現(xiàn)為肺炎，死亡率高，慢性病例主要表現(xiàn)為關(guān)機炎、乳房炎、腹膜炎等。該病在世界范圍內(nèi)廣泛存在，我國主要養(yǎng)羊省份均存在該病，特別是內(nèi)蒙古、青海、新疆、山東等養(yǎng)羊規(guī)模較大、密度較高的省份。我國最早于1935年內(nèi)蒙古就有類似該病的記錄，1942年～1943年在甘肅報告過羊傳染性胸膜肺炎的流行，其后直到當前，在內(nèi)蒙、東北、華北等地也出現(xiàn)過該病，其發(fā)病率在10～90％，死亡率通常在0.85～60％，最高可達100％。該病給我國養(yǎng)羊業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，嚴重影響?zhàn)B羊業(yè)的長期健康發(fā)展。

引起羊支原體肺炎的病原種類較多，主要包括絲狀支原體山羊亞種、山羊支原體山羊亞種和綿羊肺炎支原體3種病原，也有學者認為絲狀支原體絲狀亞種也能感染引山羊起肺炎，但病例不常見。其中絲狀支原體山羊亞種可感染山羊和綿羊，3歲以下山羊最為易感；山羊支原體山羊亞種只感染山羊，綿羊不易感；綿羊肺炎支原體可感染山羊和綿羊。感染羊是最主要的傳染源，傳播途徑主要通過接觸傳播和空氣傳播，引起綿羊支原體肺炎可以由一種支原體感染引起，也可以由2種或3種支原體混合感染所致。當前我國獲得批準的羊支原體病檢測試劑產(chǎn)品有綿羊肺炎支原體ELISA抗體檢測試劑盒、山羊傳染性胸膜肺炎間接血凝試驗抗原與陰陽性血清、綿羊支原體肺炎間接血凝試驗抗原與陰陽性血清和山羊支原體山羊肺炎亞種抗體檢測試紙條4種產(chǎn)品，但中國獸藥信息網(wǎng)的國家基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(http://vdts.ivdc.org.cn:8081/cx/)顯示，以上產(chǎn)品批準至今，均無生產(chǎn)和批簽發(fā)記錄，由此可判斷當前我國批準生產(chǎn)的羊支原體檢測試劑均沒有進行實際生產(chǎn)和銷售，分析其原因可能是產(chǎn)品與實際需求存在差距，無法滿足當前生產(chǎn)需要。當前能引起羊支原體肺炎的主要有3個支原體種類，而獲得批準的4個產(chǎn)品均只能檢測其中的1種，容易引起誤判，而且絲狀支原體山羊亞種感染沒有相應(yīng)的檢測試劑。因此，缺乏一種能一次檢測多種羊支原體感染的試劑，如果能簡單快速、可視化，則更能符合現(xiàn)場檢測的市場需求。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提供一種羊支原體肺炎平板凝集抗原及其制備方法與應(yīng)用。選用絲狀支原體山羊亞種SZ013株、山羊支原體山羊亞種SY006株和綿羊肺炎支原體MY018株研制開發(fā)的羊支原體肺炎平板凝集抗原及其對照血清，用于羊血清中羊支原體抗體的快速檢測，有助于解決我國當前羊支原體感染檢測和防控中的問題。

為了達到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

提供一種羊支原體肺炎平板凝集抗原，其使用絲狀支原體山羊亞種SZ013株、山羊支原體山羊亞種SY006株和綿羊肺炎支原體MY018株制成，其中3種支原體菌體的滅活前濃度均為7.0×10¹⁰CCU/mL。

提供一種羊支原體肺炎平板凝集抗原的制備方法，包括以下步驟：

(1)將絲狀支原體山羊亞種SZ013株、山羊支原體山羊亞種SY006株和綿羊肺炎支原體MY018株分別接種于羊支原體培養(yǎng)基，傳代后制成3種基礎(chǔ)種子菌液；

(2)將3種基礎(chǔ)種子液分別接種于羊支原體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，獲得3種生產(chǎn)種子液；