[發(fā)明專利]一種粘多糖貯積癥生物標(biāo)記物及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210958378.7
• 申請日: 2022-08-11
• 公開（公告）號: CN115032377B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚曉杰;張元媛
• 申請（專利權(quán)）人: 裕菁科技（上海）有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06
• 代理公司: 上海段和段律師事務(wù)所 31334
• 代理人: 郭國中

1.一種生物標(biāo)志物在制備粘多糖貯積癥的篩查、不同亞型診斷或風(fēng)險評估的產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物為軟骨素ABC酶和肝素裂解酶裂解的二糖單元；其中，所述肝素裂解酶包括肝素裂解酶I、肝素裂解酶II和肝素裂解酶III；

所述生物標(biāo)志物包括艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷、艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷；

用于區(qū)分MPS I型的生物標(biāo)志物為4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷；當(dāng)標(biāo)志物4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量相對于正常人群升高，且能夠檢測到艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷時，即判定為MPS I型；

用于區(qū)分MPS II型的生物標(biāo)志物為4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷；當(dāng)標(biāo)志物4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量相對于正常人群升高，且能夠檢測到艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷時，即判定為MPSII型；

用于區(qū)分MPS IVA型的生物標(biāo)志物為4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量、艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷；當(dāng)標(biāo)志物4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷含量相對于正常人群未見變化，同時，標(biāo)志物4,5-不飽和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量相對于正常人群升高，且未檢出艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷時，即判定為MPS IVA型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物的樣本來自尿液、血清、血漿、全血、干血斑中的任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物的檢測方法包括如下步驟：

1）待測樣品準(zhǔn)備，所述待測樣品為尿液樣本；

2）樣本酶解和蛋白沉淀：在待測的尿液樣本中加入酶溶液和孵育緩沖液進(jìn)行孵育，孵育后蛋白沉淀，離心取上清液；

3）上機(jī)檢測：采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對步驟2）得到的上清液進(jìn)行檢測，針對性檢測二糖單元；

其中，步驟2）中，所述酶溶液包括軟骨素裂解酶ABC溶液和肝素裂解酶溶液；其中，所述肝素裂解酶溶液包括肝素裂解酶I溶液、肝素裂解酶II溶液和肝素裂解酶III溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟2）中，孵育溫度為37±1℃，孵育時間為10~18 h；所述孵育緩沖液含Tris40-60mM，乙酸鈉50-60 mM，pH為7.0-7.5。