[發明專利]一種蘋果果實紅肉性狀鑒定方法及特異引物對

在審

• 申請號: 202210955220.4
• 申請日: 2022-08-10
• 公開（公告）號: CN116064892A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 王楠;劉文軍;陳學森;張宗營;于蕾;梅卓欣;李志強;張淑輝;張靜;毛志泉
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發明公開了一種蘋果果實紅肉性狀鑒定方法及特異引物對。本發明提供了一個引物對，命名為特異引物對乙，由序列表的序列5所示的單鏈DNA分子和序列表的序列6所示的單鏈DNA分子組成。本發明還保護所述特異引物對乙在鑒定蘋果果肉花青苷含量中的應用。本發明還保護所述特異引物對乙在鑒定或選育紅肉蘋果中的應用。采用本發明提供的引物組合和方法鑒定蘋果植株的果肉花青苷含量，能夠做到早識別、早排除，有針對的選擇育種目標，同時能夠降低育種成本、提高育種效率，對培育高花青苷含量紅肉蘋果品種提供重要理論依據。

技術領域

本發明屬于生物領域，涉及一種蘋果果實紅肉性狀鑒定方法及特異引物對。

背景技術

蘋果是世界范圍內廣泛栽培的一種落葉果樹，蘋果果實是人體維生素以及多酚類物質的主要攝取來源。其中黃酮類化合物作為一種人體容易吸收的游離多酚類物質具有抗氧化、抗衰老、預防心血管疾病等作用，對人體具有較高的營養和保健價值。我國蘋果栽培面積和年生產量均居世界首位。但我國近些年的育種目標過分注重果實的表觀及耐儲性，使得我國目前70％左右栽培品種為類黃酮含量低、營養質量差的富士蘋果。具有高營養品質的特色栽培品種少，品種結構不合理。因此培育一種類黃酮含量高的品種是目前育種工作者新的育種目標。

近些年國內外有效利用現代分子生物學技術，積極探索特色果樹資源或新品種在品質性狀形成與調控機理方面的取得了較大的進步，越來越多的與蘋果產量、抗性、品質等相關的功能基因被克隆、鑒定。紅肉蘋果中含有較高含量的黃酮類成分近些年被世界各地育種者廣泛關注。

發明內容

本發明的目的是提供一種蘋果果實紅肉性狀鑒定方法及特異引物對。

本發明提供了一個引物對，命名為特異引物對乙，由序列表的序列5所示的單鏈DNA分子和序列表的序列6所示的單鏈DNA分子組成。

本發明還保護所述特異引物對乙在鑒定蘋果果肉花青苷含量中的應用。

所述鑒定蘋果果肉花青苷含量為鑒定蘋果植株的果肉花青苷含量。

所述應用的目的為篩選果肉花青苷含量高的蘋果植株。

本發明還保護所述特異引物對乙在鑒定或選育紅肉蘋果中的應用。

所述鑒定或選育紅肉蘋果為鑒定或選育生產紅肉蘋果的蘋果植株。

所述應用的目的為篩選生產紅肉蘋果的蘋果植株。

所述應用中，供篩選的蘋果植株為：R1R1基因型的蘋果品種和R6R6基因型的蘋果品種進行雜交，獲得的雜交后代。

本發明還保護一種鑒定蘋果植株的果肉花青苷含量的方法，包括如下步驟：

以供試蘋果植株的基因組DNA為模板，采用所述特異引物對乙進行PCR擴增；

如果PCR擴增產物為一種且大小為385bp，供試蘋果植株為M1M1基因型；如果PCR擴增產物為兩種且大小分別為385bp和222bp，供試蘋果植株為M1M2基因型；

M1M1基因型蘋果植株的果肉花青苷含量高于M1M2基因型蘋果植株的果肉花青苷含量。

本發明還保護一種鑒定或選育生產紅肉蘋果的蘋果植株的方法，包括如下步驟：

以供試蘋果植株的基因組DNA為模板，采用所述特異引物對乙進行PCR擴增；

如果PCR擴增產物為一種且大小為385bp，供試蘋果植株為M1M1基因型；如果PCR擴增產物為兩種且大小分別為385bp和222bp，供試蘋果植株為M1M2基因型；

M1M1基因型蘋果植株為候選的生產紅肉蘋果的蘋果植株。

所述供試蘋果植株為：R1R1基因型的蘋果品種和R6R6基因型的蘋果品種進行雜交，獲得的雜交后代。