[發(fā)明專利]一種耐高溫蛋白酶AbTp及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210950794.2
• 申請(qǐng)日: 2022-08-09
• 公開（公告）號(hào): CN116004587A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬群;沈其榮;陳慶楠;劉東陽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/52
• 分類號(hào): C12N9/52;C12N15/57;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/06;C12R1/19
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 吳爽;徐冬濤

本發(fā)明涉及生物技術(shù)及應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種耐高溫蛋白酶AbTp及其應(yīng)用。所述蛋白酶AbTp至少包含氨基酸片段TNNHVVEGA、PFTDLAVIRAE和GGALVNAAGQVI的一種或多種。本發(fā)明所提供的耐高溫的蛋白酶AbTp，其最適溫度為70℃，最適pH?6.0，在70℃下的半衰期可達(dá)267分鐘，比活力可達(dá)1877?U·mgsupgt;?1/supgt;。將蛋白酶AbTp應(yīng)用于蝦殼蛋白質(zhì)的降解中，蛋白降解率可達(dá)61%，高于以往生物降解法中通常采用的豬來源胰蛋白酶和豬來源胃蛋白酶。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)及應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一種耐高溫蛋白酶AbTp及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

蝦殼的主要成分是碳酸鈣、蛋白質(zhì)和幾丁質(zhì)。其中，蛋白質(zhì)含量占20％～40％，通過蛋白酶水解蝦殼蛋白質(zhì)獲得多肽和氨基酸，可作為飼料和植物營(yíng)養(yǎng)液。

傳統(tǒng)的蛋白酶主要從動(dòng)物內(nèi)臟中獲得，但是受到動(dòng)物的生長(zhǎng)周期、來源與酶的特性等條件的限制：動(dòng)物來源的蛋白酶，首先需要將新鮮動(dòng)物胰臟的脂肪和結(jié)締組織剝?nèi)ィ瑩v碎后過濾，用硫酸銨沉淀得到蛋白酶原的粗品，經(jīng)胰蛋白酶激活后得到蛋白酶粗品。這種動(dòng)物來源的蛋白酶純度不高且蛋白酶的產(chǎn)量較少。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于，提供一種耐高溫蛋白酶及其應(yīng)用。本發(fā)明的蛋白酶通過基因工程的方式在大腸桿菌中的大量表達(dá)，且生長(zhǎng)周期短，更適合作在工業(yè)中應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

蛋白酶AbTp來源于高溫期堆肥宏轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)。該數(shù)據(jù)庫(kù)屬于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境保護(hù)學(xué)院劉東陽課題組。

第一方面，本發(fā)明首先保護(hù)一種蛋白酶AbTp，所述蛋白酶AbTp至少包含氨基酸片段T-N-N-H-V-V-E-G-A、P-F-T-D-L-A-V-I-R-A-E和G-G-A-L-V-N-A-A-G-Q-V-I中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述蛋白酶AbTp的氨基酸序列選自如下(A1)或(A2)：

(A1)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；

(A2)將SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列經(jīng)過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與(A1)所示的蛋白質(zhì)具有相同功能的蛋白質(zhì)。

優(yōu)選的，所述蛋白酶AbTp來源于放線菌Actinobacteria?bacterium。

第二方面，本發(fā)明還提供了生物材料，所述生物材料可為下述(B1)-(B4)中的任一種：

(B1)編碼所述蛋白酶AbTp的DNA分子；

(B2)含有(B1)所述DNA分子的表達(dá)盒；

(B3)含有(B1)所述DNA分子的重組載體、或含有(B2)所述表達(dá)盒的重組載體；

(B4)含有(B1)所述DNA分子的重組微生物、或含有(B2)所述表達(dá)盒的重組微生物、或含有(B3)所述重組載體的重組微生物。

優(yōu)選的，(B1)所述DNA分子選自如下(C1)或(C2)：

(C1)核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；

(C2)與SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或以上同源性且編碼具有相同功能蛋白質(zhì)的DNA分子。

SEQ?ID?NO：2所示的DNA分子編碼氨基酸序列SEQ?ID?NO：1的蛋白酶。